Beint RT-qPCR Kit
Lýsing
Direct RT-qPCR Kit veitir sérpakkaðan RT-qPCR biðminni og mjög skilvirkt ensímblanda (Taq, M-MLV, RI), sem gerir það þægilegt til að búa til bakendasett og kerfiaðlögun, innan einfaldrar sannprófunar.
Tæknilýsing
500T, 50.000T
Kit íhlutir
Innihald setts (20 μL hvarfkerfi) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 T | 50.000 T | |
Bein ensímblanda | 500 μL×1 | 50 ml×1 |
2× Beinn RT-qPCR biðminni | 1 ml×5 | 500 ml×1 |
Kennsla | 1 | 1 |
Rekstrarskref
Áður en hvarfefni er undirbúið skal þíða öll hvarfefnin í settinu við stofuhita og blanda varlega saman.
A: Undirbúa of sniðmát og hvarfefni
1. Undirbúið tilbúið RNA sniðmát (Mælt er með því að nota Foregene Total RNA Isolation Kit röð sett til að draga út og hreinsa RNA sniðmát) eða sýnissprunguafurð (mælt er með að nota Foregene Lysis kerfi), sérstaka grunna (10 μM) og aðrar viðeigandi rekstrarvörur, tæki.
2. Settu 2× Direct RT-qPCR buffer, RNase-Free ddH2O og 20× ROX Reference Dye (ef það er'er þörf) í kassanum með ís, þannig að þetta bráðnar náttúrulega og blandað varlega saman.
B: Undirbúa of RT-qPCR kerfi
Tafla 1 : Undirbúa of RT-qPCR skerfi
Hluti | Bindi | Endanleg einbeiting |
2× Beinn RT-qPCR biðminni | 10 μL | 1× |
Bein ensímblanda | 1μL | |
Áfram grunnur (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
Reverse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
Kanni (4 μM) | 1μL | 200nM |
Sniðmát (RNA eða lýsat) | X μL | |
20×ROX viðmiðunarlitur | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
Heildarmagn | 20μL |
C: Sett the RT-qPCR viðbrögð forrit
Tafla 2 : RT-qPCR bregðast viðon forrit stilling (fyrir dæmi: tveir-skref aðferð)
Skref | Hitastig | Tími | Hringrásir | Efni | |
1 | 50 ℃ | 15 mín | 1* | 1 | Öfug umritun |
2 | 95 ℃ | 1 mín | 1 | Pre-denaturation | |
3 | 95 ℃ | 10 sek | 40-45 | Denaturation | |
60 ℃ | 30 sek 2* | Gleypa/framlenging |
Geymsla og geymsluþol
- Settið á að geyma á -20± 5℃.Gildistími er 12 mánuðir.
-Forðastu endurteknar frystingar-þíðingarlotur (<5 lotur).