Útskýring á grunnhugtökum sameindalíffræði
1. cDNA og cccDNA: cDNA er tvíþátta DNA myndað með bakriti úr mRNA;cccDNA er plasmíð tvíþátta lokað hringlaga DNA laust við litninginn.
2. Stöðluð fellingseining: prótein aukabyggingareiningin α-helix og β-plata geta myndað byggingareiningar með sérstöku rúmfræðilegu fyrirkomulagi í gegnum ýmis tengifjölpeptíð.Þessi tegund af ákveðnum brjóta saman er venjulega kölluð ofur framhaldsbygging.Næstum öllum háskólabyggingum er hægt að lýsa með þessum samanbrotsgerðum, og jafnvel sameinuðum gerðum þeirra, svo þær eru einnig kallaðar staðlaðar fellieiningar.
3. CAP: hringlaga adenósín mónófosfat (cAMP) viðtakaprótein CRP (cAMP viðtakaprótein), flókið sem myndast eftir samsetningu cAMP og CRP kallast virkjunarprótein CAP (cAMP virkjað prótein)
4. Palindromic röð: Öfug fyllingarröð hluta af DNA broti, oft takmörkunarensímsetur.
5. micRNA: Complementary interfering RNA eða antisense RNA, sem er viðbót við mRNA röðina og getur hindrað þýðingu mRNA.
6. Ríbósím: RNA með hvatavirkni, sem gegnir sjálfhvatahlutverki í splæsingarferli RNA.
7. Mótíf: Það eru nokkur staðbundin svæði með svipaða þrívíða lögun og staðfræði í staðbundinni uppbyggingu próteinsameinda
8. Merkjapeptíð: peptíð með 15-36 amínósýruleifum á N-enda við próteinmyndun, sem stýrir yfirhimnu próteins.
9. Attenuator: Núkleótíðröð milli rekstraraðilasvæðis og byggingargens sem lýkur umritun.
10. Töfrablettur: Þegar bakteríurnar stækka og lenda í algjörum skort á amínósýrum munu bakteríurnar framleiða neyðarviðbrögð til að stöðva tjáningu allra gena.Merkin sem mynda þessa neyðarviðbrögð eru gúanósín tetrafosfat (ppGpp) og gúanósín pentafosfat (pppGpp).Hlutverk PpGpp og pppGpp er ekki bara einn eða fáir operónar, heldur hefur áhrif á mikinn fjölda þeirra, svo þeir eru kallaðir ofur-eftirlitstæki eða töfrablettir.
11. Upstream promoter element: vísar til DNA röðarinnar sem gegnir stjórnunarhlutverki í virkni promotersins, svo sem TATA á -10 svæðinu, TGACA á -35 svæðinu, enhancers og dempara.
12. DNA rannsaka: merktur hluti af DNA með þekktri röð, sem er mikið notaður til að greina óþekktar raðir og skima markgen.
13. SD röð: Það er bindingaröð ríbósóms og mRNA, sem stjórnar þýðingu.
14. Einstofna mótefni: Mótefni sem virkar aðeins gegn einum mótefnavaka.
15. Cosmíð: Það er tilbúið smíðaður utanaðkomandi DNA fergur sem heldur COS svæðum í báðum endum fögu og er tengdur við plasmíðið.
16. Bláhvítur bletturskimun: LacZ gen (sem kóðar β-galaktósíðasa), ensímið getur brotið niður litninga hvarfefnið X-gal (5-bróm-4-klór-3-indól-β-D-galaktósíð) til að framleiða blátt og þannig gert stofninn bláan.Þegar utanaðkomandi DNA er sett inn er ekki hægt að tjá LacZ genið og stofninn er hvítur til að skima raðbrigða bakteríurnar.Þetta er kallað bláhvít skimun.
17. Cis-virkandi frumefni: Sérstök röð basa í DNA sem stjórnar genatjáningu.
18. Klenow ensím: Stórt brot af DNA pólýmerasa I, að því undanskildu að 5' 3' exonucleasa virknin er fjarlægð úr DNA pólýmerasa I holóensíminu
19. Anchored PCR: notað til að magna upp DNA sem vekur áhuga með þekktri röð í öðrum endanum.Pólý-dG hala var bætt við annan enda óþekktu röðarinnar og síðan voru fjöl-dC og þekkta röðin notuð sem primers fyrir PCR mögnun.
20. Samrunaprótein: Gen heilkjörnungapróteins er tengt utanaðkomandi geni og próteinið sem samanstendur af þýðingu upprunalegs genapróteins og utanaðkomandi próteins er tjáð á sama tíma.
Önnur sameindalíffræðihugtök
1. Eðliskort af DNA er röðin sem (takmörkun endonuclease-melt) bútum DNA sameindarinnar er raðað í.
2. Klofnun RNase skiptist í tvær gerðir (sjálfhverfa) og (heterókatalysa).
3. Það eru þrír upphafsþættir í dreifkjörnungum eru (IF-1), (IF-2) og (IF-3).
4. Yfirhimnuprótein krefjast leiðsagnar (merkapeptíð) og hlutverk próteinleiðsögumanna er (hjálpar til við að brjóta saman peptíðkeðjuna inn í upprunalega sköpulag próteinsins).
5. Almennt má skipta þáttum í forvöldum í tvennt: (kjarna frumefni) og (uppstreymis frumefni).
6. Rannsóknainnihald sameindalíffræði felur aðallega í sér þrjá hluta: (byggingarsameindalíffræði), (genatjáning og stjórnun) og (DNA endurröðunartækni).
7. Lykiltilraunirnar tvær sem sýna fram á að DNA er erfðaefnið eru (pneumococcus sýking í músum) og (T2 faga sýking af Escherichia coli).möguleika).
8. Það er tvennt aðalmunur á hnRNA og mRNA: (hnRNA er splæst í því ferli að breytast í mRNA), (5' enda mRNA er bætt við með m7pGppp loki og það er auka pólýadenýlering í 3' enda mRNA sýru (polyA) hala).
9. Kostir multi-undireininga formi próteina eru (undireining er hagkvæm aðferð til DNA nýtingar), (getur dregið úr áhrifum tilviljunarkenndra villna í próteinmyndun á próteinvirkni), (virkni getur verið mjög skilvirk og hratt er opnað og lokað).
10. Megininnihald prótein brjóta vélbúnaður fyrstu kjarna kenningu felur í sér (kjarna), (bygging auðgun), (endanleg endurröðun).
11. Galaktósi hefur tvöföld áhrif á bakteríur;annars vegar (það er hægt að nota sem kolefnisgjafa fyrir frumuvöxt);á hinn bóginn (það er líka hluti af frumuveggnum).Þess vegna er þörf á cAMP-CRP-óháðum kynningarefni S2 fyrir varanlega myndun á bakgrunnsstigi;á sama tíma er þörf á cAMP-CRP-háðan promoter S1 til að stjórna myndun á háu stigi.Umritun byrjar frá (S2) með G og frá (S1) án G.
12. Raðbrigða DNA tækni er einnig þekkt sem (gena klónun) eða (sameinda klónun).Lokamarkmiðið er (að flytja erfðaupplýsingarnar DNA í einni lífveru yfir í aðra lífveru).Dæmigerð DNA endurröðunartilraun felur venjulega í sér eftirfarandi skref: (1) Dragðu út markgenið (eða utanaðkomandi gen) gjafalífverunnar og tengdu það á ensímfræðilegan hátt við aðra DNA sameind (klónunarferju) til að mynda nýja raðbrigða DNA sameind.② Raðraða DNA sameindin er flutt inn í viðtaksfrumuna og endurtekið í viðtökufrumunni.Þetta ferli er kallað umbreyting.③ Skoðaðu og auðkenndu þær viðtökufrumur sem hafa tekið upp raðbrigða DNA.④ Ræktaðu frumurnar sem innihalda raðbrigða DNA í miklu magni til að greina hvort erlenda hjálpargenið sé tjáð.
13. Það eru tvær tegundir af plasmíðafritun: þær sem eru stranglega stjórnaðar af próteinmyndun hýsilfrumu kallast (þétt plasmíð) og þær sem ekki er stranglega stjórnað af próteinmyndun hýsilfrumu kallast (afslappað plasmíð).
14. PCR hvarfkerfið ætti að hafa eftirfarandi skilyrði: a.DNA frumur (um 20 basar) með sambótaröðum á hvorum enda tveggja þráða markgensins sem á að aðskilja.b.Ensím með hitastöðugleika eins og: TagDNA pólýmerasi.c, dNTPd, DNA röð sem vekur áhuga sem sniðmát
15. Grunnhvarfsferli PCR felur í sér þrjú stig: (denaturation), (glæðing) og (framlenging).
16. Grunnferli erfðabreyttra dýra felur venjulega í sér: ① Innleiðing á klónuðu erlendu geni í kjarna frjóvgaðs eggs eða stofnfrumu úr fósturvísum;②Ígræðsla á sáð frjóvguðu eggi eða stofnfrumu fósturvísa í kvenkyns leg;③ Fullkominn fósturþroski og vöxtur fyrir afkvæmi með erlend gen;④ Notaðu þessi dýr sem geta framleitt erlend prótein sem ræktunarstofn til að rækta nýjar arfhreinar línur.
17. Hybridoma frumulínur eru búnar til með því að blanda (milta B) frumum við (myeloma) frumur og þar sem (miltafrumur) geta nýtt hypoxanthine og (beinfrumur) veitt frumuskiptingu, er hægt að rækta þær í HAT miðli.vaxa.
18. Með dýpkun rannsókna er fyrsta kynslóð mótefna kölluð (fjölstofna mótefni), önnur kynslóð (einstofna mótefni) og þriðja kynslóð (erfðatæknimótefni).
19. Í augnablikinu beinist erfðatækni skordýraveira aðallega að bakúlóveirum, sem kemur fram í innleiðingu á (exogent eiturgeni);(gen sem trufla eðlilegan lífsferil skordýra);(breyting á vírusgenum).
20. Trans-virkandi próteinþættir sem samsvara sameiginlegu frumefnunum TATA, GC og CAAT í spendýra RNA pólýmerasa II hvata eru (TFIID), (SP-1) og (CTF/NF1), í sömu röð.
tuttugu og einn.Grunnumritunarþættir RNA pólýmerasa Ⅱ eru, TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, og bindingaröð þeirra er: (D, A, B, E).Þar sem virkni TFII-D er (binding við TATA kassa).
tuttugu og tveir.Flestir umritunarþættirnir sem bindast DNA virka í formi dímera.Virk lén umritunarþátta sem bindast DNA eru venjulega eftirfarandi (helix-turn-helix), (sinkfingurmótíf), (basic-leucine) rennilásmótíf).
tuttugu og þrír.Það eru þrjár gerðir af takmörkunarendonucleasa klofningshamum: (skera á 5' hlið samhverfuássins til að mynda 5' límandi enda), (skera á 3' hlið samhverfuássins til að mynda 3' límandi enda (skera á samhverfuásinn til að búa til flata hluta) ).
tuttugu og fjórir.Plasmíð DNA hefur þrjár mismunandi stillingar: (SC stillingar), (oc stillingar), (L stillingar).Sú fyrsta í rafdrætti er (SC stillingar).
25. Utanaðkomandi genatjáningarkerfi, aðallega (Escherichia coli), (ger), (skordýr) og (spendýrafrumuborð).
26. Algengar aðferðir fyrir erfðabreytt dýr eru: (afturveirusýkingaraðferð), (DNA örsprautunaraðferð), (fósturstofnfrumuaðferð).
Umsókn Sameindalíffræði
1. Nefndu virkni fleiri en 5 RNA?
Flytja RNA tRNA Flytja amínósýra Ríbósóm RNA rRNA Ríbósóm er boðberi RNA mRNA Próteinmyndun sniðmát Misleitt kjarna RNA hnRNA Forveri þroskaðs mRNA smákjarna RNA snRNA Tekur þátt í hnRNA skeytingum Lítið umfrymis RNA scRNA/7SL-RNA frumum umfrymis RNA scRNA/7SL-RNA prótein endurræktuð blóðvökva endurræktuð og RNA afturmyndað RNA í blóðvökva /micRNA Stýrir genatjáningu Ríbósím RNA Ensímvirkt RNA
2. Hver er aðalmunurinn á dreifkjörnunga og heilkjörnungahvata?
Dreifkjörnunga TTGACA --- TATAAT------Byrjunarstaður-35 -10 Heilkjörnungabætir---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Startstaður-110 -70 -25
3. Hverjir eru helstu þættir gervibyggingar náttúrulegra plasmíða?
Náttúruleg plasmíð hafa oft galla, svo þau eru ekki hentug til notkunar sem burðarefni fyrir erfðatækni, og verður að breyta og smíða: a.Bættu við viðeigandi valmerkjagenum, svo sem tveimur eða fleiri, sem auðvelt er að nota við val, oftast sýklalyfjagen.b.Auka eða minnka viðeigandi ensímskurðarstaði til að auðvelda endurröðun.c.Stytta lengdina, skera burt óþarfa brot, bæta innflutningsskilvirkni og auka hleðslugetuna.d.Breyttu eftirmyndinni, úr þéttum í lausa, úr færri eintökum í fleiri eintök.e.Bættu við sérstökum erfðaþáttum í samræmi við sérstakar kröfur erfðatækninnar
4. Nefndu dæmi um aðferð til að mismuna skimun á vefsértæku cDNA?
Tveir frumuhópar eru útbúnir, markgenið er tjáð eða hátt tjáð í annarri frumunnar og markgenið er ekki tjáð eða lítið tjáð í hinni frumunni, og þá er markgenið fundið með blendingu og samanburði.Til dæmis, meðan æxli myndast og þróast, munu æxlisfrumur sýna mRNA með mismunandi tjáningarstigi en venjulegar frumur.Þess vegna er hægt að skima út æxlastengd gen með mismunablöndun.Einnig er hægt að nota örvunaraðferðina til að skima út genin sem tjáning er framkölluð.
5. Myndun og skimun blendingafrumulína?
B-frumur úr milta + mergæxlisfrumur, bæta við pólýetýlen glýkóli (PEG) til að stuðla að frumusamruna, og milta B-myeloma samrunafrumur ræktaðar í HAT miðli (inniheldur hypoxanthin, amínópterín, T) halda áfram að stækka næringu.Frumusamruninn inniheldur: milta-milta samrunafrumur: geta ekki vaxið, miltafrumur er ekki hægt að rækta in vitro.Bein-beinsamrunafrumur: geta ekki nýtt hypoxantín, en geta myndað púrín í gegnum seinni leiðina með því að nota fólatredúktasa.Aminopterin hamlar fólatredúktasa og getur því ekki vaxið.Bein-milta samrunafrumur: geta vaxið í HAT, miltafrumur geta notað hypoxanthine og beinfrumur sjá um frumuskiptingu.
6. Hver er meginreglan og aðferðin við að ákvarða frumbyggingu DNA með dideoxy terminal termination aðferð (Sanger aðferð)?
Meginreglan er að nota núkleótíðkeðjustöðva-2,,3,-dídeoxýnúkleótíð til að stöðva framlengingu DNA.Þar sem það skortir 3-OH sem þarf til að mynda 3/5/fosfódíestertengi, þegar það hefur verið fellt inn í DNA keðjuna, er ekki hægt að lengja DNA keðjuna frekar.Samkvæmt meginreglunni um basapörun, hvenær sem DNA pólýmerasi þarf dNMP til að taka þátt í venjulega framlengdu DNA keðjunni, eru tveir möguleikar, annar er að taka þátt í ddNTP, sem leiðir til þess að deoxýnukleótíðkeðjulenging lýkur;hitt er að taka þátt í dNTP , þannig að DNA keðjan geti samt haldið áfram að lengjast þar til næsta ddNTP er innlimað.Samkvæmt þessari aðferð er hægt að fá hóp af mismunandi lengdum DNA búta sem enda á ddNTP.Aðferðin er að skipta í fjóra hópa, ddAMP, ddGMP, ddCMP og ddTMP.Eftir hvarfið getur pólýakrýlamíð gel rafdráttur lesið DNA röðina í samræmi við sundböndin.
7. Hver eru jákvæð reglugerðaráhrif activator protein (CAP) á umritun?
Hringlaga adenýlat (cAMP) viðtakaprótein CRP (cAMP viðtakaprótein), flókið sem myndast við samsetningu cAMP og CRP er kallað CAP (cAMPvirkjað prótein).Þegar E. coli er ræktað í miðli sem skortir glúkósa eykst myndun CAP og CAP hefur það hlutverk að virkja hvata eins og laktósa (Lac).Suma CRP-háða virkjunarhópa skortir dæmigerðan -35 svæðisröðunareiginleika (TTGACA) sem algengir ýtar hafa.Þess vegna er erfitt fyrir RNA pólýmerasi að bindast því.Tilvist CAP (virkni): getur verulega bætt bindifasta ensíms og hvata.Það sýnir aðallega eftirfarandi tvo þætti: ① CAP hjálpar ensímsameindinni að stefna rétt með því að breyta sköpulagi hvatarans og víxlverkunina við ensímið, til að sameinast -10 svæðinu og gegna því hlutverki að skipta um virkni -35 svæðisins.②CAP getur einnig hindrað bindingu RNA-pólýmerasa við aðra staði í DNA, og þar með aukið líkurnar á að bindast við sérstakan hvata þess.
8. Hvaða skref eru venjulega innifalin í dæmigerðri DNA endurröðunartilraun?
a.Dragðu út markgenið (eða utanaðkomandi gen) gjafalífverunnar og tengdu það á ensímfræðilegan hátt við aðra DNA sameind (klónunarferju) til að mynda nýja raðbrigða DNA sameind.b.Flyttu raðbrigða DNA sameindina inn í viðtaksfrumuna og endurtakaðu og varðveittu hana í viðtökufrumunni.Þetta ferli er kallað umbreyting.c.Skoðaðu og auðkenndu þær viðtökufrumur sem hafa tekið upp raðbrigða DNA.d.Fjölrækta frumurnar sem innihalda raðbrigða DNA til að greina hvort erlenda hjálpargenið sé tjáð.
9. Uppbygging genasafns Þrjár aðferðir við skimun á raðbrigðaefnum eru gefnar upp og ferlinu lýst stuttlega.
Sýklalyfjaónæmisskimun, innsetningaróvirkjun ónæmis, skimun á bláhvítum bletti eða PCR skimun, mismunaskimun, DNA rannsaka Flestir klónunarferjur bera sýklalyfjaónæmisgen (and-ampicillin, tetracýklín).Þegar plasmíðið er flutt inn í Escherichia coli munu bakteríurnar öðlast ónæmi og þær sem eru án flutnings hafa ekki viðnám.En það getur ekki greint hvort það hefur verið endurskipulagt eða ekki.Í ferju sem inniheldur tvö ónæmisgen, ef aðskotahlutur DNA er settur inn í eitt genanna og veldur því að genið er óvirkt, er hægt að nota tvær plötustýringar sem innihalda mismunandi lyf til að skima fyrir jákvæðum raðbrigðum.Til dæmis inniheldur pUC plasmíðið LacZ genið (sem kóðar β-galaktósíðasa), sem getur brotið niður litninga hvarfefnið X-gal (5-bróm-4-klór-3-indól-β-D-galaktósíð) til að framleiða blátt og þannig gert stofninn bláan.Þegar erlenda DNA er sett inn er ekki hægt að tjá LacZ genið og stofninn er hvítur til að skima raðbrigða bakteríurnar.
10. Útskýrðu grunnferlið við að fá erfðabreytt dýr í gegnum fósturstofnfrumur?
Fósturstofnfrumur (ES) eru fósturvísafrumur við fósturþroska, sem geta verið tilbúnar ræktaðar og fjölgað og hafa það hlutverk að sérhæfast í aðrar tegundir frumna.Ræktun ES frumna: Innri frumumassi blastocystunnar er einangraður og ræktaður.Þegar ES er ræktað í fóðrunarlausu lagi mun það sérhæfast í ýmsar starfhæfar frumur eins og vöðvafrumur og N frumur.Þegar ES er ræktað í miðli sem inniheldur trefjafrumur, mun ES viðhalda aðgreiningarvirkninni.ES er hægt að meðhöndla erfðafræðilega og hægt er að samþætta aðgreiningarvirkni þess án þess að hafa áhrif á aðgreiningarvirkni þess, sem leysir vandamálið af handahófskenndri samþættingu.Settu utanaðkomandi gen inn í stofnfrumur úr fósturvísum, settu síðan inn í leg þungaðra kvenmúsa, þróast í ungar og krossa til að fá arfhreinar mýs.
