Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Bein frumulýsun frumutilbúið Eins skrefs qRT-PCR sett
Lýsingar
Þetta sett notar einstakt lýsisbuffakerfi sem getur fljótt losað RNA úr ræktuðum frumusýnum fyrir RT-qPCR viðbrögð og þar með útrýmt tímafrekt og erfiðu RNA hreinsunarferlinu.Hægt er að fá RNA sniðmátið á aðeins 7 mínútum.Hinn 5×Direct RT Mix og 2×Bein qPCR Mix-SYBR hvarfefni sem settið veitir geta á fljótlegan og áhrifaríkan hátt náð magnbundnum PCR niðurstöðum í rauntíma.
5×Direct RT Mix og 2×Direct qPCR Mix-SYBR hefur sterka hemlaþol og hægt er að nota lýsið af sýnunum sem sniðmát fyrir RT-qPCR beint.Þetta sett inniheldur einstaka Foregene bakritarasa með mikilli sækni RNA og Hot D-Taq DNA pólýmerasa, dNTPs, MgCl2, hvarfstuðpúði, PCR fínstillingu og sveiflujöfnun.
Tæknilýsing
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit íhlutir
| Hluti I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Part II | DNA strokleður |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX viðmiðunarlitur | |
| RNase-frítt ddH2O | |
| Leiðbeiningar | |
Eiginleikar og kostir
■Einfalt og áhrifaríkt: með Cell Direct RT tækni er hægt að fá RNA sýni á aðeins 7 mínútum.
■ Eftirspurn eftir sýni er lítil, allt að 10 frumur er hægt að prófa.
■ Mikil afköst: það getur fljótt greint RNA í frumum sem eru ræktaðar í 384, 96, 24, 12, 6-brunnu plötum.
■ DNA Eraser getur fljótt fjarlægt losað erfðamengi, dregið verulega úr áhrifum á síðari tilraunaniðurstöður.
■ Fínstillt RT og qPCR kerfi gerir tveggja þrepa RT-PCR bakritun skilvirkari og PCR sértækari og ónæmari fyrir RT-qPCR viðbragðshemlum.
Kit umsókn
Notkunarsvið: ræktaðar frumur.
- RNA losað með sýnisgreiningu: á aðeins við um RT-qPCR sniðmát þessa setts.
- Settið er hægt að nota í eftirfarandi tilgangi: genatjáningargreiningu, sannprófun á siRNA-miðluðum genaþagnaráhrifum, lyfjaskimun o.fl.
Skýringarmynd
Geymsla og geymsluþol
Hluti I af þessu setti ætti að geyma við 4 ℃;Part II ætti að geyma við -20 ℃.
Foregene Protease Plus II á að geyma við 4℃, má ekki frjósa við -20 ℃.
Hvarfefni 2×Direct qPCR Mix-SYBR á að geyma við -20℃í myrkrinu;ef það er notað oft er einnig hægt að geyma það á 4℃ fyrir skammtímageymslu (notið innan 10 daga).
Real Time PCR grunnur hönnunarreglur
Forward Primer og Reverse Primer
Fyrir rauntíma PCR er grunnhönnun mjög mikilvæg.Primers tengjast sérhæfni og skilvirkni PCR mögnunar og er hægt að hanna með vísan til eftirfarandi meginreglna:
Grunnur lengd: 18-30bp.
GC innihald: 40-60%.
Tm gildi: Grunnur hönnunarhugbúnaður, eins og Primer 5, getur gefið Tm gildi grunnsins.Tm-gildi uppstreymis og niðurstreymis primers ættu að vera eins nálægt og hægt er.Tm reikniformúluna er einnig hægt að nota: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Þegar PCR er framkvæmt er hitastig undir grunngildi Tm 5 °C almennt valið sem hitastig fyrir glæðingu (samsvarandi hækkun á hitastigi hitastigsins getur aukið sérhæfni PCR hvarfsins).
Grunnur og PCR vörur:
Hönnun primer PCR mögnunarafurðarlengd er helst 100-150bp.
Forðast skal hönnunargrunna á aukabyggingarsvæði sniðmátsins eins mikið og mögulegt er.
Forðastu myndun 2 eða fleiri sambótabasa á milli 3′ enda uppstreymis og downstream primers.
Grunnur 3′ endastöð getur ekki verið til staðar með 3 viðbótar G eða C í röð.
Primerarnir sjálfir geta ekki haft viðbótarbyggingar, annars myndast hárnálabygging sem hefur áhrif á PCR mögnun.
ATCG ætti að dreifa eins jafnt og hægt er í grunnröðinni og forðast skal 3′ endabasann sem T.
Viðauki 1: Cell Direct RT-qPCR Kit íhluta viðbótarpakki
1.Frumulýsilausn
|
| |||
| Kit íhlutir (24-brunn lýsiskerfi / brunnur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Hlutiég | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| HlutiII | DNA strokleður | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Blanda
|
| |
| Kit íhlutir (20 μl hvarfkerfi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-frjáls ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kit íhlutir (20 μl hvarfkerfi) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX viðmiðunarlitur | 40 μl | 200 μl |
| RNase-frjáls ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Leiðbeiningarhandbækur:
