(96-brunn) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
Lýsingar
The(96-brunn) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–SYBR Grænn Iveitireinstakt lysis buffer kerfito losar RNA fljóttúr ræktuðum frumumsýni fyrir RT-qPCR viðbrögð, útrýma tímafrekt og erfiðuRNA hreinsunarferli, og tekur aðeins 7 mínútur að fá nauðsynlega RNA sniðmát.The5× Direct RT Mixog2× Direct qPCR Mix-SYBRfylgir í kassanum getur fljótt ogfá í raun rauntíma magnPCR niðurstöður.
5× Direct RT Mix og 2× Direct qPCR Mix-SYBR hafa sterka hemlaþol og geta notað lýsatið af sýninu sem á að prófa sem sniðmát fyrir skilvirka öfuga umritun og sértæka mögnun.Hvarfefnið inniheldur Foregene einstakt bakrit með mikilli sækni í RNA, sem og heitan D-Taq DNA fjölliðun, dNTP, MgCl2 , hvarfstuðpúða, PCR fínstillingar og sveiflujöfnunar, og er hægt að nota í tengslum við leysistuðpúða til að greina sýnið fljótt, auðveldlega og nákvæmlega, og það hefur einkenni mikils næmni, sterkrar sértækni og góðan stöðugleika.
Settið miðar að örkerfisgreiningu á 96-brunn ræktuðum frumum og hefur góða einsleitni og samkvæmni;íhlutir settsins veita 96 lýsuviðbrögð, 96 öfug umritunarviðbrögð og 96×2 qPCR viðbrögð, sem geta mætt 96-brunn frumuplötunni til notkunar í eitt skipti, forðast mengun sem stafar af endurtekinni opnun, frystingu og þíðingu hvarfefna og niðurbroti á frammistöðu hvarfefna.
Kit íhlutir
| Samsetning setts ( 50 μL ljósakerfi/20 μLRT hvarfkerfi /20μL qPCR hvarfkerfi) | DRT-03011 | Athugasemd | |
| 96T | |||
| HlutiI | BufferCL | 5 ml | CellLýsing |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Hluti II | DNAStrokleður | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Bein qPCR blanda-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX viðmiðunarlitur | 400µL | ||
| RNase- ÓkeypisddH2 O | 1,7ml |
| |
| Márlega | 1 stykki | 1 skammtur | |
*: Rýsu hvarfefnið DNA Eraser er innifalið í II. hluta settsins;Hægt er að kaupa frumulýsingu, RT og qPCR íhluti sérstaklega.
Eiginleikar og kostir
■Einfalt og áhrifaríkt: með Cell Direct RT tækni er hægt að fá RNA sýni á aðeins 7 mínútum.
■ Eftirspurn eftir sýni er lítil, allt að 10 frumur er hægt að prófa.
■ Mikil afköst: það getur fljótt greint RNA í frumum sem eru ræktaðar í 384, 96, 24, 12, 6-brunnu plötum.
■ DNA Eraser getur fljótt fjarlægt losað erfðamengi, dregið verulega úr áhrifum á síðari tilraunaniðurstöður.
■ Fínstillt RT og qPCR kerfi gerir tveggja þrepa RT-PCR bakritun skilvirkari og PCR sértækari og ónæmari fyrir RT-qPCR viðbragðshemlum.
Kit umsókn
Notkunarsvið: ræktaðar frumur.
- RNA losað með sýnisgreiningu: á aðeins við um RT-qPCR sniðmát þessa setts.
- Settið er hægt að nota í eftirfarandi tilgangi: genatjáningargreiningu, sannprófun á siRNA-miðluðum genaþagnaráhrifum, lyfjaskimun o.fl.
Geymsla og geymsluþol
Hluta I af þessu setti ætti að geyma á 4℃;Part II ætti að geyma við -20 ℃.
Foregene Protease Plus II á að geyma við 4℃, má ekki frjósa við -20 ℃.
Hvarfefni 2×Direct qPCR Mix-Taqman á að geyma við -20℃í myrkrinu;ef það er notað oft er einnig hægt að geyma það á 4℃ fyrir skammtímageymslu (notið innan 10 daga).
Real Time PCR grunnur hönnunarreglur
Forward Primer og Reverse Primer
Fyrir rauntíma PCR er grunnhönnun mjög mikilvæg.Primers tengjast sérhæfni og skilvirkni PCR mögnunar og er hægt að hanna með vísan til eftirfarandi meginreglna:
- Grunnur lengd: 18-30bp.
- GC innihald: 40-60%.
- Tm gildi: Grunnur hönnunarhugbúnaður, eins og Primer 5, getur gefið Tm gildi grunnsins.Tm-gildi uppstreymis og niðurstreymis primers ættu að vera eins nálægt og hægt er.Tm reikniformúluna er einnig hægt að nota: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Þegar PCR er framkvæmt er hitastig undir grunngildi Tm 5 °C almennt valið sem hitastig fyrir glæðingu (samsvarandi hækkun á hitastigi hitastigsins getur aukið sérhæfni PCR hvarfsins).
- Grunnur og PCR vörur:
- Hönnun primer PCR mögnunarafurðarlengd er helst 100-150bp.
- Forðast skal hönnunargrunna á aukabyggingarsvæði sniðmátsins eins mikið og mögulegt er.
- Forðastu myndun 2 eða fleiri sambótabasa á milli 3′ enda uppstreymis og downstream primers.
- Grunnur 3′ endastöð getur ekki verið til staðar með 3 viðbótar G eða C í röð.
- Primerarnir sjálfir geta ekki haft viðbótarbyggingar, annars myndast hárnálabygging sem hefur áhrif á PCR mögnun.
- ATCG ætti að dreifa eins jafnt og hægt er í grunnröðinni og forðast skal 3′ endabasann sem T.
Viðauki1: Cell BeintRT-qPCR Kit hlutit viðbót pakki
1.Cell Lysis Solution
| Frumulýsilausn | |||
| Kit íhlutir (24-brunn lýsiskerfi / brunnur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Hlutiég | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| HlutiII | DNA strokleður | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT blanda | |
| Kit íhlutir (20 μl hvarfkerfi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-frjáls ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR blanda | ||
| Kit íhlutir (20 μl hvarfkerfi) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX viðmiðunarlitur | 40 μl | 200 μl |
| RNase-frjáls ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Leiðbeiningarhandbækur:
