Cell Total RNA Einangrunarsett Heildar RNA einangrunarhreinsunarsett úr frumu
Kit Lýsing:
Mjög hreinsað og hágæða heildar-RNA er hægt að fá úr ýmsum ræktuðum frumum á 11 mínútum.
RNase-frjáls
Notað við stofuhita (15-25 ℃)
Með DNA-hreinsunarsúlu
Hár RNA afrakstur
Hratt: Ljúktu útdrætti á 11 mínútum
Öryggi: Ekkert Lífrænt efni
Lýsing
Þetta sett notar snúningssúluna og formúluna sem Foregene hefur þróað, sem getur á skilvirkan hátt dregið út háhreint og hágæða heildar-RNA úr frumum sem eru ræktaðar í 96, 24, 12 og 6 holu plötum.
Settið býður upp á skilvirka DNA-hreinsunarsúlu, sem getur auðveldlega aðskilið flot og frumulýsi, bundið og fjarlægt erfðafræðilegt DNA.Aðgerðin er einföld og tímasparandi.
TRNA-einungis súlan getur á skilvirkan hátt bundið RNA með einstakri formúlu.Hægt er að vinna úr miklum fjölda sýna samtímis.
Kit íhlutir
| Samsetning setts | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNase-frítt ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-aðeins dálkur | 50 | 200 |
| DNA-hreinsunarsúla | 50 | 200 |
| Kennsla | 1 | 1 |
*Vinsamlegast notið hanska og gerið verndarráðstafanir meðan á aðgerðinni stendur þar sem Buffer cRL1 og Buffer RW1 innihalda ertandi chaotropic sölt.
Eiginleikar og kostir
■ Allt ferlið er keyrt við stofuhita (15-25 ℃), án ísbaðs og skilvindu við lágan hita.
■ Allt settið er RNase-frjáls, engin þörf á að hafa áhyggjur af niðurbroti RNA.
■ DNA-hreinsunarsúla bindur DNA sérstaklega, þannig að settið getur fjarlægt erfðafræðilega DNA mengun án þess að bæta við viðbótar DNasa.
■ Mikil RNA afrakstur: Einungis RNA Dálkur og einstök formúla geta hreinsað RNA á skilvirkan hátt.
■ Hraður hraði: auðvelt í notkun og hægt að klára það á 11 mínútum.
■ Öryggi: Engin lífræn hvarfefni er nauðsynleg.
■ Hágæða: Hreinsað RNA er af miklum hreinleika, laust við prótein og önnur óhreinindi og getur staðist ýmsar síðari tilraunir.
Kit umsókn
Það er hentugur til útdráttar og hreinsunar á heildar-RNA úr ræktuðum frumum í 96, 24, 12 og 6 holu plötum.
Vinnuflæði
Skýringarmynd
Skýringarmynd agarósa hlaup rafhlöðunnar af Cell Total RNA Isolation Kit meðhöndlaði ofangreindan mismunandi fjölda frumna, 20μl rúmmálsskolun, taktu 2μl hreinsað heildar RNA 1%.
Geymsla og geymsluþol
Settið má geyma í 12 mánuði við stofuhita (15–25 ℃) eða 2–8 ℃ í lengri tíma (24 mánuði).
Hægt er að geyma buffer cRL1 við 4 ℃ í 1 mánuð eftir að 2-hýdroxý-1-etanetíóli er bætt við (valfrjálst).
RNA er ekki dregið út eða afrakstur RNA er lág
Það eru oft ýmsir þættir sem hafa áhrif á skilvirkni bata, svo sem: RNA innihald vefsýnissýnis, vinnsluaðferð, skolrúmmál o.s.frv.
1. Ísbað eða kryógenísk (4 °C) skilvindu var framkvæmd meðan á aðgerðinni stóð.
Ráðlegging: Vinnið við stofuhita (15-25°C) í öllu ferlinu, ekki ísbað og skilið við lágt hitastig.
2. Óviðeigandi varðveisla sýna eða of langur geymslutími sýna.
Ráðlegging: Geymið sýni við -80 °C eða frystið í fljótandi köfnunarefni og forðastu endurtekna frystingar-þíðingu;reyndu að nota ferskan vef eða ræktaðar frumur til RNA útdráttar.
3. Ófullnægjandi sýnisgreining.
Ráðlegging: Þegar vefur er einsleitur skal tryggja að vefurinn sé nægilega einsleitur og að veffrumurnar séu nægilega klofnar til að skýra losun RNA.
4. Losunarefninu er ekki bætt á réttan hátt.
Tilmæli: Staðfestu að RNase-Free ddH2O er bætt í dropatali við miðja hreinsunarsúluhimnu.
5. Rétt magn af algeru etanóli var ekki bætt við Buffer RL2 eða Buffer RW2.
Ráðlegging: Fylgdu leiðbeiningunum, bættu réttu magni af algeru etanóli við Buffer RL2 og Buffer RW2 og blandaðu vel saman áður en settið er notað.
6. Skammtur vefjasýnis er ekki viðeigandi.
Ráðlegging: Notaðu 10-20 mg af vefjum eða (1-5) × 106frumur á 500 μl biðminni RL1, þar sem óhófleg vefjanotkun getur leitt til minni útdráttar RNA.
7. Óviðeigandi skolunarrúmmál eða ófullkomin skolun.
Ráðlegging: Skolunarrúmmál hreinsunarsúlunnar er 50-200 μl;ef skolunaráhrifin eru ekki fullnægjandi er mælt með því að lengja uppsetningartímann við stofuhita eftir að forhituðu RNase-Free ddH hefur verið bætt við.2O, td í 5-10 mín.
8.Hreinsunarsúlan hefur etanólleifar eftir Buffer RW2 þvott.
Ráðlegging: Ef það eru etanólleifar eftir þvott með Buffer RW2, skilvindu í tómum túpum í 1 mín., má auka tímann fyrir skiljun í tómu túpunni í 2 mín, eða setja hreinsunarsúluna við stofuhita í 5 mínútur til að fjarlægja etanólleifar nægilega vel.
Hreinsað RNA er brotið niður
Gæði hreinsaðs RNA eru tengd þáttum eins og varðveislu sýnisins, RNase mengun og meðhöndlun osfrv.
1. Vefjasýni eru ekki geymd í tíma.
Ráðlegging: Ef vefjasýni eða frumur eru ekki notuð tímanlega eftir söfnun, skal tafarlaust frysta við -80 °C eða fljótandi köfnunarefni.Til að draga út RNA, notaðu nýtekið vef- eða frumusýni þegar mögulegt er.
2. Endurtekin frostþíðing vefjasýna.
Ráðleggingar: Þegar vefjasýni eru geymd er best að skera þau í litla bita til varðveislu og fjarlægja einn bita þegar þeir eru notaðir til að forðast endurtekna frostþíðingu á sýninu og niðurbrot RNA.
3. RNase er innleitt eða ekki með einnota hanska, grímur o.s.frv. meðan á aðgerðinni stendur.
Ráðlegging: RNA útdráttartilraunir eru best gerðar í aðskildum RNA meðferðarherbergjum og borðið er hreinsað fyrir tilraunina.
Notaðu einnota hanska og grímur meðan á tilrauninni stendur til að lágmarka niðurbrot RNA af völdum innleiðingar RNase.
4. Hvarfefni eru menguð af RNase við notkun.
Ráðlegging: Skiptu út fyrir nýtt Animal Total RNA einangrunarsett fyrir tengdar tilraunir.
5. Skilvindurörin, oddarnir o.s.frv., sem notuð eru við RNA-meðferð, eru menguð af RNase.
Ráðlegging: Staðfestu að skilvindurörin, oddarnir, pípetturnar o.s.frv. sem notaðar eru við RNA-útdrátt séu öll RNase-laus.
Hreinsað fengin RNA hefur áhrif á tilraunir niðurstreymis
RNA hreinsað með hreinsunarsúlunni, ef saltjónirnar, próteininnihaldið er of stórt mun hafa áhrif á tilraunina á eftir, svo sem: öfug umritun, Northern Blot et al.
1. Hið skolaða RNA hefur saltjónaleifar.
Ráðlegging: Staðfestu að réttu magni af etanóli hafi verið bætt við Buffer RW2 og framkvæmið 2 hreinsunarsúluþvotta við miðflóttahraðann sem tilgreindur er fyrir notkun;ef einhverjar saltjónaleifar eru til staðar, látið hreinsunarsúluna standa í Buffer RW2 í 5 mínútur við stofuhita og framkvæma skilvindu til að hámarka fjarlægingu saltmengunar.
2. Etanólleifar í skoluðu RNA.
Ráðlegging: Staðfestu að eftir þvott á biðminni RW2, framkvæmið skiljunaraðgerðina á tómu rörinu við skilvinduhraðann sem tilgreindur er til notkunar, lengdu tímann fyrir skiljunaraðgerðina á tómu rörinu í 2 mínútur ef enn eru etanólleifar, eða láttu það vera við stofuhita í 5 m.
