Cell Direct RT qPCR Kit—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready One-skref qRT-PCR Kits rannsaka
Lýsingar
Þessi vara notar einstakt lýsisbuffakerfi til að losa fljótt RNA úr ræktuðum frumusýnum fyrir RT-qPCR viðbrögð, útrýma tímafrekt og erfiðu RNA hreinsunarferlinu, og aðeins 7 mínútur til að fá nauðsynlega RNA sniðmát, með 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman sem settið býður upp á getur fengið rauntíma PCR niðurstöður á fljótlegan og skilvirkan hátt.
5× Direct RT Mix og 2× Direct qPCR Mix-Taqman hafa sterka hemlaþol og geta framkvæmt skilvirka viðsnúning og sértæka mögnun með því að nota lýsis sýnisins sem á að mæla sem sniðmát.Hvarfefnið inniheldur Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer og Stabilizer, sem hægt er að nota með lysis buffer til að greina sýni á fljótlegan og auðveldan hátt, og hefur einkenni mikils næmis, sértækni og stöðugleika.
Tæknilýsing
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit íhlutir
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Kit íhlutir 20μl qPCR viðbragðskerfi | DRT-01021 | DRT-01022 | Athugið | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Hluti I | Buffer CL | 4 ml | 20 ml | Frumulýsing |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Hluti II | DNA strokleður | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Bein RT blanda * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX viðmiðunarlitur | 40 μl | 200 μl | ||
| RNase-frjáls ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Leiðbeiningar bæklingur | 1 stykki | 1 stykki | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman er hægt að kaupa sér
Eiginleikar og kostir
■Einfalt og áhrifaríkt: með Cell Direct RT tækni er hægt að fá RNA sýni á aðeins 7 mínútum.
■ Eftirspurn eftir sýni er lítil, allt að 10 frumur er hægt að prófa.
■ Mikil afköst: það getur fljótt greint RNA í frumum sem eru ræktaðar í 384, 96, 24, 12, 6-brunnu plötum.
■ DNA Eraser getur fljótt fjarlægt losað erfðamengi, dregið verulega úr áhrifum á síðari tilraunaniðurstöður.
■ Fínstillt RT og qPCR kerfi gerir tveggja þrepa RT-PCR bakritun skilvirkari og PCR sértækari og ónæmari fyrir RT-qPCR viðbragðshemlum.
Kit umsókn
Notkunarsvið: ræktaðar frumur.
- RNA losað með sýnisgreiningu: á aðeins við um RT-qPCR sniðmát þessa setts.
- Settið er hægt að nota í eftirfarandi tilgangi: genatjáningargreiningu, sannprófun á siRNA-miðluðum genaþagnaráhrifum, lyfjaskimun o.fl.
Geymsla og geymsluþol
Hluta I af þessu setti ætti að geyma á 4℃;Part II ætti að geyma við -20 ℃.
Foregene Protease Plus II á að geyma við 4℃, má ekki frjósa við -20 ℃.
Hvarfefni 2×Direct qPCR Mix-Taqman á að geyma við -20℃í myrkrinu;ef það er notað oft er einnig hægt að geyma það á 4℃ fyrir skammtímageymslu (notið innan 10 daga).
Real Time PCR grunnur hönnunarreglur
Forward Primer og Reverse Primer
Fyrir rauntíma PCR er grunnhönnun mjög mikilvæg.Primers tengjast sérhæfni og skilvirkni PCR mögnunar og er hægt að hanna með vísan til eftirfarandi meginreglna:
- Grunnur lengd: 18-30bp.
- GC innihald: 40-60%.
- Tm gildi: Grunnur hönnunarhugbúnaður, eins og Primer 5, getur gefið Tm gildi grunnsins.Tm-gildi uppstreymis og niðurstreymis primers ættu að vera eins nálægt og hægt er.Tm reikniformúluna er einnig hægt að nota: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Þegar PCR er framkvæmt er hitastig undir grunngildi Tm 5 °C almennt valið sem hitastig fyrir glæðingu (samsvarandi hækkun á hitastigi hitastigsins getur aukið sérhæfni PCR hvarfsins).
- Grunnur og PCR vörur:
- Hönnun primer PCR mögnunarafurðarlengd er helst 100-150bp.
- Forðast skal hönnunargrunna á aukabyggingarsvæði sniðmátsins eins mikið og mögulegt er.
- Forðastu myndun 2 eða fleiri sambótabasa á milli 3′ enda uppstreymis og downstream primers.
- Grunnur 3′ endastöð getur ekki verið til staðar með 3 viðbótar G eða C í röð.
- Primerarnir sjálfir geta ekki haft viðbótarbyggingar, annars myndast hárnálabygging sem hefur áhrif á PCR mögnun.
- ATCG ætti að dreifa eins jafnt og hægt er í grunnröðinni og forðast skal 3′ endabasann sem T.
Viðauki1: Cell BeintRT-qPCR Kit hlutit viðbót pakki
1.Cell Lysis Solution
| Frumulýsilausn | |||
| Kit íhlutir (24-brunn lýsiskerfi / brunnur) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Hlutiég | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| HlutiII | DNA strokleður | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT blanda | |
| Kit íhlutir (20 μl hvarfkerfi) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-frjáls ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR blanda | ||
| Kit íhlutir (20 μl hvarfkerfi) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX viðmiðunarlitur | 40 μl | 200 μl |
| RNase-frjáls ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Leiðbeiningarhandbækur:
