Leiðbeiningar um greiningu vandamála

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

Ekkert RNA er hægt að draga út eða afrakstur kjarnsýru er lágur

Það eru venjulega margir þættir sem hafa áhrif á skilvirkni endurheimtarinnar, svo sem: RNA innihald sýnis, aðferð við notkun, rúmmál skolunar osfrv.。

Greining á algengum orsökum:

1.Ísbað eða lághita (4 ° C) skilvindu meðan á notkun stendur.

Tillaga: Við stofuhita (15-25 ° C) notkun, aldrei ísbað og lághitaskilvinda.

2. Óviðeigandi sýnisgeymsla eða sýnisgeymslu of lengi.

Tillaga: Geymið sýni við -80 ° C eða frystið í fljótandi köfnunarefni og forðastu endurtekna frystingar-þíðingu;reyndu að nota nýsöfnuð sýni til RNA útdráttar.

3.Ófullnægjandi sýnisleysi

Tilmæli: Vinsamlega gakktu úr skugga um að sýnið og vinnulausnin (línuleg akrýlamíð) hafi verið vandlega blandað og ræktað í 10 mínútur við stofuhita (15-25 ° C)

4.Skolefninu var ranglega bætt við

Ráðlegging: Gakktu úr skugga um að RNase-Free ddH2O sé bætt við miðja himnu hreinsunarsúlunnar

5.Óviðeigandi rúmmál af vatnsfríu etanóli í Buffer viRW2

Tillaga: Vinsamlegast fylgdu leiðbeiningunum, bættu réttu magni af vatnsfríu etanóli við Buffer viRW2 og blandaðu þeim vel áður en settið er notað.

6.Röng sýnishornsnotkun.

Tillaga: 200µl af sýni á 500µl af Buffer viRL.Of mikið sýnisrúmmál mun leiða til minni útdráttarhraða RNA.

7.Óviðeigandi skolunarrúmmál eða ófullkomin skolun.

Tillaga: Rúmmál hreinsunarsúlunnar er 30-50μl;ef skolunaráhrifin eru ekki fullnægjandi er mælt með því að bæta við forhituðu RNase-frjáls ddH₂O og lengja tímann með því að setja við stofuhita, svo sem 5-10 mín

8.Hreinsunarsúla hefur etanólleifar eftir skolun í Buffer viRW2.

Tillaga: Ef etanól er enn eftir eftir að hafa skolað í Buffer viRW2 og skilvindu í tómt rör í 2 mínútur, má láta hreinsunarsúluna standa við stofuhita í 5 mínútur eftir skilvindu í tómt rör til að fjarlægja afganginn af etanóli að fullu.

Niðurbrot hreinsaðra RNA sameinda

Gæði hreinsaðs RNA eru tengd þáttum eins og geymslu sýna, RNase mengun og virkni.

Greining á algengum orsökum:

1.Söfnuðu sýnin voru ekki vistuð í tíma.

Tillaga: Ef sýnið er ekki notað í tíma eftir söfnun, vinsamlegast geymdu það strax við -80 ℃ eða fljótandi köfnunarefni.Til að draga RNA sameindir, reyndu að nota nýsöfnuð sýni þegar mögulegt er.

2.Söfnuð sýni voru fryst og þíða ítrekað.

Tillaga: Forðist endurtekna frystingu og þíðingu (ekki oftar en einu sinni) meðan á sýnatöku og geymslu stendur, annars minnkar afrakstur kjarnsýru.

3.RNase var settur inn á skurðstofu eða ekki notaðir einnota hanskar, grímur o.s.frv.

Tillaga: Tilraun útdráttar á RNA sameindum er best framkvæmd í sérstakri RNA skurðstofu og tilraunaborðið er hreinsað fyrir tilraunina.Notaðu einnota hanska og grímur meðan á tilrauninni stendur til að forðast niðurbrot RNA af völdum RNase innleiðingar.

4.Hvarfefnið er mengað af RNase meðan á notkun stendur.

Tillaga: Skiptu út fyrir nýtt veiru RNA einangrunarsett fyrir tengdar tilraunir.

5. RNase-mengunin í skilvinduglösunum, pípettuoddunum o.s.frv. Tillaga: Gakktu úr skugga um að skilvinduglösin, pípettuoddarnir og pípetturnar séu allar RNase-frjálsar.

Hreinsuðu RNA sameindirnar höfðu áhrif á tilraunir á eftir

RNA sameindirnar sem hreinsaðar eru með hreinsunarsúlunni munu hafa áhrif á tilraunir eftir strauminn ef það eru of mikið af saltjónum eða próteinum, svo sem: öfug umritun, Northern Blot o.s.frv.。

1.Það eru eftir saltjónir í skoluðu RNA sameindunum.

Ráðlegging: Gakktu úr skugga um að réttu magni af vatnsfríu etanóli hafi verið bætt við Buffer viRW2 og þvoðu hreinsunarsúluna tvisvar í samræmi við réttan skilvinduhraða á notkunarleiðbeiningunum; Ef enn eru saltjónir eftir geturðu bætt Buffer viRW2 í hreinsunarsúluna og látið hana standa við stofuhita í 5 mín.Framkvæmdu síðan skilvindu til að fjarlægja saltjónamengun að mestu leyti

2.Það eru eftir etanól í skoluðu RNA sameindunum

Tillaga: þegar búið er að staðfesta að hreinsunarsúlur hafi verið skolaðar með Buffer viRW2, framkvæmið skilvindu í tómu röri í samræmi við miðflóttahraðann í notkunarleiðbeiningunum.Ef enn er etanól eftir má láta það standa í 5 mínútur við stofuhita eftir skilvindu í tómt rör til að fjarlægja það sem eftir er sem mest.

Leiðbeiningarhandbækur:

Veiru RNA einangrunarsett Leiðbeiningarhandbók