Escherichia Coli O157: H7 kjarnsýrugreiningarsett (PCR-flúrljómunarprófunaraðferð/frostþurrkun)
Kit Lýsing:
Cat.No.FP103
Það er notað til skjótrar uppgötvunar og skimunar á E. coli O157:H7 í matvælum, fóðri, vatnssýnum og umhverfissýnum.
Lýsingar
Það er notað fyrirHraðgreining og skimun á E. coli O157:H7 í matvælum, fóðri, vatnssýnum og umhverfissýnum.
[Prófunarregla]
Samkvæmt meginreglunni um flúrljómandi PCR tækni eru sérstakir grunnar og Taqman rannsakar hannaðir fyrir sértæka genið Escherichia coli O157: H7 og greindir með flúrljómandi PCR tæki, til að gera grein fyrir Escherichia coli O157: H7 Eigindleg uppgötvun DNA.
Innihald setts
Athugið: ROX rásarmælir er ekki innifalinn.
| Cstjórnarliðar | Forskrift | Qmagn |
| Buffer A | Slöngur | 1 |
| Buffer B | Slöngur | 1 |
| Jákvæð stjórn | Slöngur | 1 |
| Neikvæð stjórn | Slöngur | 1 |
Áætluð notkun
Það er notað fyrir Hraðgreining og skimun á E. coli O157:H7 í matvælum, fóðri, vatnssýnum og umhverfissýnum.
Geymsluskilyrði og fyrningardagsetning
Geymið við -20 ℃ í myrkri og forðastu endurtekna frystingu og þíðingu.
Gildistími er 12mánuði, og framleiðsludagur er sýndur á ytri umbúðum.
Hljóðfæri og rekstrarvörur
Flúrljómandi magn PCR tæki, pípettubyssu og samsvarandi odd, hvirfilhristari, lítill skilvindu.
Notkun
1. Sýnisvinnsla
1.1 Sýnagerð: Þetta sett er hentugur fyrir matvæli, fóður, vatnssýni og önnur sýni sem grunur leikur á að séu menguð af Escherichia coli O157:H7.Fyrir djúpunnar kjötvörur, drykkjarvörur og önnur efni sem innihalda litarefni þarf að skola þau til að forðast að hafa áhrif á flúrljómunarmerkjasöfnunina.
1.2 Sýnavinnsla: Vísað til "GB 4789.10-2016 Food Safety National Standard Food Microbiological Examination of Escherichia coli O157: H7 Test" fyrir undirbúning sýna, auðgunarræktun og einangrun Escherichia coli O157: H7.
- Núkleínsýruútdráttur
Taktu 20 mL af auðgunarlausn í 1,5 mL skilvindurör, bætið 200 μL af örverulýsi saman við (viðbótarsett er nauðsynlegt), hringið í 30 sekúndur, skilið stuttlega og setjið til hliðar.
Athugasemdir: Útdráttur kjarnsýra úr lýsinu ætti að vera lokið innan 10 mínútna og er ekki hægt að geyma það í langan tíma.
3. Kjarnsýrumögnun
3.1 Kveiktu á flúrljómandi magni PCR tækinu til notkunar.
Buffer A og Buffer B úr settinu, bræddu þá vandlega og skildu stuttlega.Bætið 18 μL Buffer A og 2 μL Buffer B í hvert PCR hvarfglas.Bætið síðan 5 ml af hvorri neikvæðu samanburðarhópnum, útdreginni kjarnsýru og jákvæða samanburðinum í PCR hvarfglös, lokið á glösin og skilið í skilvindu stuttlega.
3.3 Flyttu PCR hvarfrörið yfir í flúrljómandi PCR vél og notaðu eftirfarandi aðferðir til að framkvæma mögnunartilraunir: veldu 25 ml fyrir hvarfkerfið, safnaðu flúrljómunarmerkjum við 60°C fyrir hverja lotu og veldu FAM fyrir greiningarrásina.
| Skref | Forrit | Fjöldi lota |
| 1 | 37 ℃ 5 mín | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 mín | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60℃ 30s (safna flúrljómun) |
Leiðbeiningar um greiningu vandamála
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Ekkert RNA er hægt að draga út eða afrakstur kjarnsýru er lágur
Það eru venjulega margir þættir sem hafa áhrif á skilvirkni endurheimtarinnar, svo sem: RNA innihald sýnis, aðferð við notkun, rúmmál skolunar osfrv.。
Greining á algengum orsökum:
1.Ísbað eða lághita (4 ° C) skilvindu meðan á notkun stendur.
Tillaga: Við stofuhita (15-25 ° C) notkun, aldrei ísbað og lághitaskilvinda.
2. Óviðeigandi sýnisgeymsla eða sýnisgeymslu of lengi.
Tillaga: Geymið sýni við -80 ° C eða frystið í fljótandi köfnunarefni og forðastu endurtekna frystingar-þíðingu;reyndu að nota nýsöfnuð sýni til RNA útdráttar.
3.Ófullnægjandi sýnisleysi
Tilmæli: Vinsamlega gakktu úr skugga um að sýnið og vinnulausnin (línuleg akrýlamíð) hafi verið vandlega blandað og ræktað í 10 mínútur við stofuhita (15-25 ° C)
4.Skolefninu var ranglega bætt við
Ráðlegging: Gakktu úr skugga um að RNase-Free ddH2O sé bætt við miðja himnu hreinsunarsúlunnar
5.Óviðeigandi rúmmál af vatnsfríu etanóli í Buffer viRW2
Tillaga: Vinsamlegast fylgdu leiðbeiningunum, bættu réttu magni af vatnsfríu etanóli við Buffer viRW2 og blandaðu þeim vel áður en settið er notað.
6.Röng sýnishornsnotkun.
Tillaga: 200µl af sýni á 500µl af Buffer viRL.Of mikið sýnisrúmmál mun leiða til minni útdráttarhraða RNA.
7.Óviðeigandi skolunarrúmmál eða ófullkomin skolun.
Tillaga: Rúmmál hreinsunarsúlunnar er 30-50μl;ef skolunaráhrifin eru ekki fullnægjandi er mælt með því að bæta við forhituðu RNase-frjáls ddH2O og lengja tímann með því að setja við stofuhita, svo sem 5-10 mín
8.Hreinsunarsúla hefur etanólleifar eftir skolun í Buffer viRW2.
Tillaga: Ef etanól er enn eftir eftir að hafa skolað í Buffer viRW2 og skilvindu í tómt rör í 2 mínútur, má láta hreinsunarsúluna standa við stofuhita í 5 mínútur eftir skilvindu í tómt rör til að fjarlægja afganginn af etanóli að fullu.
Niðurbrot hreinsaðra RNA sameinda
Gæði hreinsaðs RNA eru tengd þáttum eins og geymslu sýna, RNase mengun og virkni.
Greining á algengum orsökum:
1.Söfnuðu sýnin voru ekki vistuð í tíma.
Tillaga: Ef sýnið er ekki notað í tíma eftir söfnun, vinsamlegast geymdu það strax við -80 ℃ eða fljótandi köfnunarefni.Til að draga RNA sameindir, reyndu að nota nýsöfnuð sýni þegar mögulegt er.
2.Söfnuð sýni voru fryst og þíða ítrekað.
Tillaga: Forðist endurtekna frystingu og þíðingu (ekki oftar en einu sinni) meðan á sýnatöku og geymslu stendur, annars minnkar afrakstur kjarnsýru.
3.RNase var settur inn á skurðstofu eða ekki notaðir einnota hanskar, grímur o.s.frv.
Tillaga: Tilraun útdráttar á RNA sameindum er best framkvæmd í sérstakri RNA skurðstofu og tilraunaborðið er hreinsað fyrir tilraunina.Notaðu einnota hanska og grímur meðan á tilrauninni stendur til að forðast niðurbrot RNA af völdum RNase innleiðingar.
4.Hvarfefnið er mengað af RNase meðan á notkun stendur.
Tillaga: Skiptu út fyrir nýtt veiru RNA einangrunarsett fyrir tengdar tilraunir.
5. RNase-mengunin í skilvinduglösunum, pípettuoddunum o.s.frv. Tillaga: Gakktu úr skugga um að skilvinduglösin, pípettuoddarnir og pípetturnar séu allar RNase-frjálsar.
Hreinsuðu RNA sameindirnar höfðu áhrif á tilraunir á eftir
RNA sameindirnar sem hreinsaðar eru með hreinsunarsúlunni munu hafa áhrif á tilraunir eftir strauminn ef það eru of mikið af saltjónum eða próteinum, svo sem: öfug umritun, Northern Blot o.s.frv.。
1.Það eru eftir saltjónir í skoluðu RNA sameindunum.
Ráðlegging: Gakktu úr skugga um að réttu magni af vatnsfríu etanóli hafi verið bætt við Buffer viRW2 og þvoðu hreinsunarsúluna tvisvar í samræmi við réttan skilvinduhraða á notkunarleiðbeiningunum; Ef enn eru saltjónir eftir geturðu bætt Buffer viRW2 í hreinsunarsúluna og látið hana standa við stofuhita í 5 mín.Framkvæmdu síðan skilvindu til að fjarlægja saltjónamengun að mestu leyti
2.Það eru eftir etanól í skoluðu RNA sameindunum
Tillaga: þegar búið er að staðfesta að hreinsunarsúlur hafi verið skolaðar með Buffer viRW2, framkvæmið skilvindu í tómu röri í samræmi við miðflóttahraðann í notkunarleiðbeiningunum.Ef enn er etanól eftir má láta það standa í 5 mínútur við stofuhita eftir skilvindu í tómt rör til að fjarlægja það sem eftir er sem mest.
Leiðbeiningarhandbækur:
Veiru RNA einangrunarsett Leiðbeiningarhandbók
