Lágt hlutfall A260/A230 stafar venjulega af óhreinindum með hámarks frásogsbylgjulengd við 230nm.Við skulum sjá hvað þessi óhreinindi innihalda:

• Algeng mengunarefni	Frásogsbylgjulengd	Hlutfallsáhrif
  Prótein	~230nm og 280nm	Samtímis lækkun á A260/A 280og A260/A 280hlutföllum
  Guanidín salt	220-240 nm	Minnkaðu A260/A 280hlutfall
  Fenól	~270nm	-
  Trizol	~230nm og 270nm	Minnkaðu A260/A 280hlutfall
  EDTA	~230nm	Minnkaðu A260/A 280hlutfall
  Etanól	230-240 nm	Minnkaðu A260/A 280hlutfall

 
 
 
Frásogsbylgjulengd og skuggagildi algengra mengunarefna

Protein mengun
Líta má á próteinmengun sem algengustu mengun í kjarnsýruútdráttarferlinu.Prótein er til á milli efri vatnsfasans og þess neðrilífræntáfanga.Mengun mun draga úr hlutfallinu A260/A280 og A260/A230 á sama tíma og hlutfallið A260/A230 mun breytast augljósari en hlutfallið A260/A280.
Á síðariöfug umritunor qPCR viðbrögð, próteinleifar geta hamlað eða truflað virkni ensíma.Besta leiðin til að forðast próteinmengun er að hafa í huga meginregluna um „frekar minna en meira, lítið magn oft“ þegar flotið er sogað upp.

2. Guanidinium mengun
hýdróklóríð (GuHCl) og gúanidínþíósýanat (GTC) hafa þau áhrif að eðlismengandi prótein, sem geta fljótt eyðilagt frumuhimnur meðan á kjarnsýruútdráttarferlinu stendur, sem veldur próteinafvæðingu og útfellingu.Frásogsbylgjulengd GuHCl og GTC er á milli 220-240 nm, ogleifar gúanidínsalts mun draga úr hlutfallinu A260/A230.Þó að afgangs guanidiniumsalt muni draga úr hlutfallinu,áhrifin á tilraunir neðanstreymis eru í raun hverfandi.

3. Trizol mengun
Aðalhluti Trizol er fenól.Meginhlutverk fenóls er að greina frumur og losa prótein og kjarnsýruefni í frumum.Þrátt fyrir að fenól geti á áhrifaríkan hátt denaturated prótein, getur það ekki hamlað RNase virkni algjörlega.Þess vegna er 8-hýdroxýkínólíni, gúanidínísóþíósýanati, β-merkaptóetanóli o.s.frv. bætt við TRIzol til að hamla innrænum og utanaðkomandi RNase.
Þegar frumu-RNA er dregið út, getur Trizol greint frumurnar hratt og hindrað núkleasann sem losnar úr frumunum og afgangurinn af Trizol mun draga verulega úr hlutfallinu A260/A230.
Vinnsluaðferð: Við skilvindu verður að hafa í huga að fenólið í Trizol er auðleysanlegt í vatnsfasanum við skilyrði 4° og stofuhita.

4. Etanól leifar
Etanól er notað í lokaferlinu til að fella út DNA á meðan það leysir upp saltjónir sem kunna að vera bundnar við DNA.Frásogsbylgjulengd hæstvfrásog hámarki afetanól er einnig við 230-240 nm, semmun einnig lækka hlutfallið A260/A230.
Aðferðina til að forðast etanólleifar má endurtaka tvisvar á meðan á lokaskoluninni stendur og blása innútblásturí tvær mínútur til að leyfa etanólinu að gufa upp að fullu áður en jafnalausn er bætt við til skolunar.
Hins vegar ætti að vera vitað að hlutfallið er aðeins matsvísitala RNA-gæða.Ef ofangreind starfsemi er stranglega stjórnað mun frávikið á milli hlutfalls og staðalbils ekki hafa mikil áhrif á tilraunir neðanstreymis.
Skyldar vörur:
Animal Total RNA einangrunarsett
Plant Total RNA einangrunarsett
Cell Total RNA einangrunarsett
Plant Total RNA Einangrunarsett Plus