Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit fyrir plöntu rík af fjölsykrum og fjölfenólum
Kit Lýsing:
Vörunúmer RE-05021/05022/05024
Til hreinsunar á heildar-RNA úr almennum plöntusýnum sem innihalda mikið af fjölsykrum og fjölfenólþáttum.
Dragðu fljótt út hágæða heildar-RNA úr plöntusýnum með mikið innihald af fjölsykrum og fjölfenólum.
RNase-frjáls notkun DNA-hreinsunarsúlu
Einfalt - öllum aðgerðum er lokið við stofuhita
Hratt—aðgerð er hægt að ljúka á 30 mínútum
Öruggt - ekkert lífrænt hvarfefni notað 
Tæknilýsing
50 undirbúningur, 200 undirbúningur
Settið notar snúningssúluna og formúluna sem Foregene hefur þróað, sem getur á skilvirkan hátt dregið út háhreint og hágæða heildar-RNA úr ýmsum plöntuvef með mikið fjölsykrur eða fjölfenól innihald.Það veitir DNA-hreinsunarsúluna sem getur auðveldlega fjarlægt erfðafræðilegt DNA úr flotinu og vefjalýsinu.Einungis RNA súla getur í raun bundið RNA.Settið getur unnið úr miklum fjölda sýna á sama tíma.
Allt kerfið inniheldur ekki RNase, þannig að hreinsað RNA verður ekki brotið niður.Buffer PRW1 og Buffer PRW2 geta tryggt að RNA sem fæst sé ekki mengað af próteini, DNA, jónum og lífrænum efnasamböndum.
Kit íhlutir
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-frjáls ddH2O, DNA-hreinsunarsúla |
| RNA-aðeins dálkur |
Eiginleikar og kostir
■ Notkun við stofuhita (15-25 ℃) í öllu ferlinu, án ísbaðs og lághitaskilvindu.
■ Fullkomið sett RNase-frjáls, engin þörf á að hafa áhyggjur af niðurbroti RNA.
■ Hentar sérstaklega vel til hreinsunar á RNA úr plöntusýnum af fjölsykrum og fjölfenólum.
■ DNA-hreinsunarsúla binst sérstaklega DNA, þannig að settið getur fjarlægt erfðafræðilega DNA mengun án þess að bæta við DNasa.
■ Mikil RNA afrakstur: Einungis RNA Dálkur og einstök formúla geta hreinsað RNA á skilvirkan hátt.
■ Hraður hraði: auðvelt í notkun og hægt að klára það á 30 mínútum.
■ Öryggi: ekki er þörf á lífrænu hvarfefni.
■ Hágæða: Hreinsuðu RNA bútarnir eru af miklum hreinleika, lausir við prótein og önnur óhreinindi og geta mætt ýmsum tilraunanotkun síðar.
Vörubreytur
■ Niðurstraumsnotkun: fyrsta strengs cDNA nýmyndun, RT-PCR, sameindaklónun, Northern Blot o.fl.
■ Sýnishorn: Ferskur eða frosinn plöntuvefur af fjölsykrum og fjölfenólum
■ Skammtar: 50mg plöntuvef
■ Hámarks RNA bindingargeta hreinsunarsúlunnar: 80 μg
■ Rúmmál skolunar: 50-200 μl
Kit umsókn
Það er hentugur fyrir útdrátt og hreinsun á heildar-RNA úr ferskum eða frosnum plöntuvefssýnum (sérstaklega ferskum plöntublaðavef) með hátt fjölsykrum og fjölfenólinnihaldi.
Vinnuflæði
Skýringarmynd
Plant Total RNA Isolation Kit Plus vann 50 mg af ferskum laufum af fjölsykrum og fjölfenólum og 5% hreinsað RNA var prófað með rafdrætti.
1: Banani
2: Ginkgo
3: Bómull
4: Granatepli
Geymsla og geymsluþol
Þetta sett er hægt að geyma í 24 mánuði við þurrar aðstæður við stofuhita (15-25 ℃);ef það þarf að geyma það í lengri tíma er hægt að geyma það í 2–8 ℃.
Hægt er að setja Buffer PSL1 við 4 ℃ í 1 mánuð eftir að β-merkaptóetanól er bætt við (mælt er með því að bæta því við á sama tíma tilraunarinnar).
Dálkurinn tengdur
Eftir að súlunni er stíflað minnkar RNA afraksturinn eða jafnvel ómögulegt að hreinsa RNA og RNA massinn sem fæst er lítill.
Algeng orsök greining:
1. Sýnahlé eru ekki ítarleg.
Sýnabrot veldur því ekki að DNA-HREIFANDI DÝLI stíflast að fullu, en hefur á sama tíma áhrif á RNA-afrakstur og gæði.Við mælum með hraðri malaaðgerð í nægilegu fljótandi köfnunarefni þegar þú braut sýnin, Reyndu að mylja sýnisfrumuvegginn, frumuhimnuna og annan vef.Fyrir plöntusýni af pólýól fjölsykrum mælum við með að þú notir Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. Þegar aðskilið sýnisfljótandi vökvi er sogað með DNA-hreinsunarsúlu, getur hugsanlega frumubrotið botnfall verið andað að sér.
Frumbrotið set sem tekið er mun valda RNA-ONLY dálknum sem verður stíflað þegar RNA aðsogsaðgerðin er framkvæmd (sjá skref 6).Við mælum með því að þú sogið þetta fljótandi vökva varlega til að forðast að frumurusl sogist.
3. Upphafsmagn sýnis er of mikið.
Of mikil sýnisnotkun mun leiða til ófullkominnar sýnisbrots eða ófullkominnar frumugreiningar með Buffer PSL1, sem leiðir til stíflu á hreinsunarsúlunni meðan á hreinsun stendur.Heildar-RNA einangrunarsett fyrir plöntur Hvert einstakt hreinsað rekstrarsýni er 50 mg.Fyrir plöntusýni af pólýól fjölsykrum mælum við með að þú prófir Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Hitastig skilvindunnar er of lágt.
Allt RNA einangrunar- og hreinsunarferlið fer fram við stofuhita (20-25°C), að því undanskildu að sýnisvefurinn er brotinn af fljótandi köfnunarefni. Hitastig sumra kryógenískra skilvinda er lægra en 20℃, sem getur valdið stíflu á DNA-hreinsunarsúlu og/eða RNA-eingöngu súlu.Ef þetta gerist skaltu stilla skilvinduhitastigið á 20-25℃, ogGakktu úr skugga um að lýsisblandan og/eða flotið sem bætt var við etanóli hafi verið forhitað í 37°C.
Ekkert RNA dregið út eða afrakstur RNA er lág
Það eru venjulega margir þættir sem hafa áhrif á skilvirkni endurheimtarinnar, svo sem: RNA innihald sýnis, vinnsluaðferð, skolunarrúmmál osfrv.
Greining á algengum orsökum eins og hér að neðan:
1. Ísbað eða skiljun við lágan hita (4°C) var framkvæmd meðan á aðgerðinni stóð.
Tillaga: Notið við stofuhita (15-25°C) í öllu ferlinu, ekki gera ísbað og miðflótta við lágan hita.
2. RNA hefur verið brotið niður vegna óviðeigandi varðveislu sýnisins eða langtímavarðveislu sýnisins.
Tilmæli: Nýsöfnuð sýni ættu að vera fljótfryst í fljótandi köfnunarefni og síðan geymd við -80°C í langan tíma, forðast endurtekna frystingu og þíðingu sýna;eða drekka sýnin strax í RNA stabilizer RNAlater lausn (dýrasýni).
3. Ófullnægjandi sundrun sýnis og leysis leiðir til stíflu á hreinsunarsúlunni.
Tillaga: Þegar vefurinn er malaður, vinsamlegast vertu viss um að vefurinn sé nægilega malaður og færðu hann fljótt yfir í fyrirfram tilbúinn Buffer PSL1 (staðfestu að réttu hlutfalli β-ME hafi verið bætt við, sjá skref 1 í aðferðinni).
4.Skolefninu var ranglega bætt við.
Tillaga: Gakktu úr skugga um að RNase-Free ddH2O sé dreypt í miðja hreinsunarsúluhimnu.
5. Rétt magn af algeru etanóli var ekki bætt við Buffer PSL2 eða Buffer PRW2.
Tillaga: Vinsamlegast fylgdu leiðbeiningunum, bættu réttu magni af algeru etanóli við Buffer PSL2 og Buffer PRW2 og blandaðu vel saman áður en settið er notað.
6. Magn vefjasýnis er óviðeigandi.
Tillaga: Notaðu 50 mg af vefjum fyrir hverja 500 μl af Buffer PSL1.Notkun of mikils vefja mun draga úr magni RNA sem er dregið út og hreinleiki RNA sem myndast mun einnig minnka.Við mælum eindregið með því að upphafsskammtur sýnis fari ekki yfir 50 mg fyrir hverja RNA-útdráttaraðgerð.
7. Óviðeigandi skolunarrúmmál eða ófullkomin skolun.
Tillaga: Rúmmál skolunar í hreinsunarsúlunni er 50-200 μl;ef skolunaráhrifin eru ekki fullnægjandi er mælt með því að lengja tímann við stofuhita eftir að forhituðu RNase-Free ddH2O hefur verið bætt við, svo sem 5-10 mín.
8.Hreinsunarsúlan hefur etanólleifar eftir þvott með BufferPRW2.
Tillaga: Ef tóma rörið er skilið í skilvindu í 1 mín og það er enn etanól eftir eftir þvott í Buffer PRW2, getur þú aukið tíma skilvindu tóma rörsins í 2 mínútur, eða sett hreinsunarsúluna við stofuhita í 5 mínútur til að fjarlægja afgangs etanólið að fullu.
9. Settið var rangt notað.
Tillaga: Fyrir plöntusýni af fjölfenólum fjölsykrum getur verið að notkun algengra setta eins og Plant Total RNA Isolation Kit gæti ekki fengið tilvalin RNA sýni.Við mælum með að þú notir Plant Total RNA IsolationKit Plus, sem er sérstaklega hannað fyrir fjölfenólísk fjölsykru plöntusýni.Sett sem er sérstaklega þróað til að vinna RNA úr fjölfenóli og fjölsykru plöntusýnum.
OD260/OD280 gildi er lágt
RNA skolun með ddH2O og notuð til að lesa litrófsmæli leiðir til lágs OD260/OD280 gildi.Við mælum með því að nota 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (frekar en RNase-Free ddH2O til að skola út RNA) til að fá tiltölulega rétt OD260/OD280 gildi, sjá „RNA styrkingar- og hreinsunarprófanir“ á blaðsíðu 19.
Hreinsað RNA er brotið niður
Gæði hreinsaðs RNA eru tengd þáttum eins og varðveislu sýna, RNase mengun og meðferð.
Greining á algengum orsökum:
1.Vefjasýni voru ekki geymd í tæka tíð eftir söfnun.
Tilmæli: Ef vefjasýnin eru ekki notuð í tæka tíð eftir söfnun, vinsamlegast geymdu þau strax í fljótandi köfnunarefni við lágan hita eða færðu þau strax yfir í -80°C til langtímageymslu eftir hraðfrystingu í fljótandi köfnunarefni, eða dýfðu sýnunum strax í RNA stabilizer RNAlater lausn (dýrasýni).Fyrir RNA útdrátt, reyndu að nota nýsöfnuð vefjasýni.
2.Endurtekin frysting og þíðing vefjasýna.
Tillaga: Þegar vefjasýni eru geymd er best að skera þau í litla bita til varðveislu og taka hluta af þeim út þegar þau eru notuð til að forðast niðurbrot RNA sem stafar af endurtekinni frystingu og þíðingu sýna.
3.RNase er kynnt á skurðstofu eða ekki notaðir einnota hanska, grímur o.fl.
Tillaga: Best er að framkvæma RNA útdráttartilraunir í aðskildum RNA-aðgerðum og skal þrífa rannsóknarstofuborðið fyrir tilraunina og nota einnota hanska og grímur meðan á tilrauninni stendur til að forðast niðurbrot RNA af völdum innleiðingar RNase í sem mestum mæli.
4.Hvarfefnið er mengað af RNase við notkun.
Tillaga: Skiptu út fyrir nýja röð af heildar RNA útdráttarsettum úr plöntum fyrir tengdar tilraunir.
5. Skilvindurörin og pípettuoddarnir sem notaðir eru til að meðhöndla RNA eru mengaðir af RNase.
Tillaga: Gakktu úr skugga um að skilvindurörin, pípettuoddarnir, pípetturnar o.s.frv. sem notaðar eru við RNA-útdrátt séu öll RNase-frjáls.
Leiðbeiningarhandbækur:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus leiðbeiningarhandbók
