Sniðþurrkur/FTA kort DNA einangrunarsett Genomic DNA útdráttur eða hreinsunarsett úr munnþurrku
Kit Lýsing:
Hreinsaðu fljótt hágæða erfðafræðilegt DNA úr munnþurrku/FTA kortasýnum.
◮Engin RNase mengun:Aðeins DNA súlan sem settið býður upp á gerir það mögulegt að fjarlægja RNA úr erfðaefni DNA án þess að bæta við RNase meðan á tilrauninni stendur, sem kemur í veg fyrir að rannsóknarstofan mengist af utanaðkomandi RNase.
◮Hraður hraði:Foregene prótein hefur meiri virkni en svipaðar próteasar og meltir vefjasýni fljótt;aðgerðin er einföld og hægt er að ljúka erfðafræðilegri DNA-útdráttaraðgerð á 20-80 mínútum.
◮Þægilegt:Skiljunin fer fram við stofuhita og engin þörf er á 4°C lághitaskilvindu eða etanólútfellingu á DNA.
◮Öryggi:Ekki er þörf á útdrætti úr lífrænum hvarfefni.
◮Hágæða:Útdregna erfðafræðilega DNAið hefur stór brot, ekkert RNA, enginn RNase og afar lágt jónainnihald, sem getur uppfyllt kröfur ýmissa tilrauna.
◮Örlosunarkerfi:Það getur aukið styrk erfðafræðilegs DNA, sem er þægilegt fyrir niðurstreymis uppgötvun eða tilraunir.
Lýsing
Þetta sett veitir skilvirka og hraðvirka aðferð til að fá hástyrkt erfðafræðilegt DNA úr munnþurrku og FTA-korti (blóðblettir).Að nota fyrirtækið okkar's einstaka DNA-eingöngu kísilhimnu snúningssúlu og formúlu, ásamt Foregene próteasa, er hægt að vinna hástyrkt, hágæða erfðafræðilegt DNA á 80 mínútum.Sérhönnuð litla hreinsunarsúlan bindur erfðafræðilegt DNA og hægt er að skola út DNA með litlu magni (15μl) skolunarkerfi til að auka styrk erfðafræðilegs DNA sem fæst, sem er þægilegt fyrir niðurstreymis uppgötvun eða tilraun.Settið getur unnið eitt eða fleiri sýni í einu og hreinsunarferlið krefst ekki útdráttar á lífrænum efnum eins og fenóli, klóróformi og tímafrekri ísóprópanóli eða etanólútfellingu og aðgerðin er einföld og tímasparandi.
Tæknilýsing
50 Undirbúningur
Kit íhlutir
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Línulegt akrýlamíð |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foregene próteasi |
| Dálkur eingöngu fyrir DNA |
| Leiðbeiningar |
Eiginleikar og kostir
-Engin RNase-mengun: DNA-einungis súlan sem settið býður upp á gerir það mögulegt að fjarlægja RNA úr erfðafræðilegu DNA án þess að bæta við RNase meðan á tilrauninni stendur og forðast að rannsóknarstofan mengist af utanaðkomandi RNase.
-Fljótur hraði: Foregene prótein hefur meiri virkni en svipaðar próteasar, meltir sýni fljótt;einföld aðgerð.
-Þægilegt: Skiljunin er framkvæmd við stofuhita og engin þörf er á 4°C lághitaskilvindu eða etanólútfellingu DNA.
-Öryggi: Engin lífræn hvarfefnisútdráttur er nauðsynlegur.
-Hágæði: Útdregna erfðafræðilega DNAið hefur stór brot, ekkert RNA, ekkert RNase og afar lágt jónainnihald, sem getur uppfyllt kröfur ýmissa tilrauna.
-Micro-elution system: Það getur aukið styrk erfðafræðilegs DNA, sem er þægilegt fyrir niðurstreymis uppgötvun eða tilraunir.
Kit umsókn
Það er hentugur til að hreinsa erfðafræðilegt DNA úr eftirfarandi sýnum: munnþurrkur, FTA kort (blóðblettir).
Geymsla og geymsluþol
-Þetta sett má geyma í 12 mánuði við þurrar aðstæður við stofuhita (15-25°C);ef það þarf að geyma það í lengri tíma má geyma það við 2-8°C.
Athugið: Ef lausnin er geymd við lágan hita er hætta á útfellingu.Vertu viss um að setja lausnina í settið við stofuhita í nokkurn tíma fyrir notkun.Ef nauðsyn krefur, forhitið það í 37°C vatnsbaði í 10 mínútur til að leysa upp botnfallið og blandið því saman fyrir notkun.
-Foregene Protease lausn hefur einstaka formúlu, sem er virk þegar hún er geymd við stofuhita í langan tíma (3 mánuði);Virkni þess og stöðugleiki verður betri þegar hann er geymdur við 4°C, svo mælt er með að geyma hann við 4°C, muna að hafa hann ekki við -20°C.
Hreinsunarsúlan er stífluð
Í þessu setti, við erfðafræðilega DNA útdráttaraðgerðina, er hreinsunarsúlan aðsoguð beint á ensímlýsublöndu sýnisins án skilvinduskrefs og hreinsunarsúlan getur verið stífluð vegna ófullkominnar ensímmyndunar og mikillar seigju sýnisins.
Eftirfarandi mögulegar orsakir eru sem hér segir:
1. Ófullkomin ensímmelting vefjasýna.
Ráðlegging: Hægt er að lengja sýnisvinnslutíma Foregene próteasa á viðeigandi hátt eða taka ofanvatnið eftir skilvindu við 12.000 rpm (~13.400 × g) í 5 mínútur.
2. Óhófleg notkun vefjasýna eða stórra vefja.
Ráðlegging: Best er að ekki sé meira en 1 munnþurrkur í sýninu;ef sýnið er of stórt, aukið skammtinn af Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 í samræmi við það.
3. Sýnisseigjan er of há.
Ráðlegging: Hægt er að þynna sýni á viðeigandi hátt með 10 mM af Tris-HCl fyrir erfðafræðilega DNA útdrátt.
4. Brot af blóðkortinu hafa verið soguð.
Ráðlegging: Tímabundinn skilvindutími í þrepi 6 við erfðaefnisútdrátt blóðbletta (FTA-korts) er hægt að lengja á viðeigandi hátt.
Lítil uppskera eða ekkert DNA
Það eru oft ýmsir þættir sem hafa áhrif á afköst erfðaefnis DNA, þar á meðal uppruna sýna, geymsluaðstæður sýna, undirbúningur sýna, meðhöndlun osfrv.
Ekki er hægt að fá erfðafræðilegt DNA við útdrátt
Mögulegar orsakir eru sem hér segir:
1. Óviðeigandi varðveisla sýna eða geymsla í of langan tíma leiðir til erfðafræðilegs DNA niðurbrots.
Ráðlegging: Helst ætti að taka ný sýni úr munnþurrku og ekki er ráðlegt að nota varðveitta þurrku fyrir erfðafræðilega DNA útdráttaraðgerðir;blóðblettasýni ættu að tryggja að gæðin séu hæf og geymslutíminn ætti ekki að vera of langur.
2. Of lítil vefjanotkun getur leitt til þess að ekki er dregið úr samsvarandi erfðaefnis DNA.
Tilmæli: Fylgdu leiðbeiningum um sýnatöku úr munnþurrku í aðgerðahandbókinni og þurrkaðu eins oft og mögulegt er svo hægt sé að festa nægilega mikið af frumum við munnþurrku fyrir erfðafræðilega DNA útdrátt;fyrir útdrátt blóðblettasýnis er hægt að auka skurðsvæðið á blóðblettum á viðeigandi hátt.
3. Foregene próteasi er óviðeigandi varðveitt, sem leiðir til lækkunar á virkni þess eða óvirkjunar.
Ráðlegging: Staðfestu geymsluskilyrði Foregene próteasans eða skiptu honum út fyrir nýjan Foregene próteasa fyrir ensímhvarf.
4. Óviðeigandi varðveisla settsins eða geymslutími er of langur, sem leiðir til bilunar á sumum íhlutum í settinu.
Ráðlegging: Keyptu nýtt DNA einangrunarsett fyrir munnþurrku fyrir tengdar aðgerðir.
5. Buffer WB bætir ekki við algeru etanóli.
Ráðlegging: Staðfestu að biðminni WB bætir við réttu magni af algeru etanóli.
6. Skorefninu er ekki rétt bætt við sílikonfilmuna.
Ráðlegging: Bætið 65 °C forhituðum skolefnisdropum við miðja sílikonhimnuna og látið standa við stofuhita í 5 mínútur til að auka skilvirkni skolunar.
Low-yield erfðafræðilegt DNA einangrað
Eftirfarandi mögulegar orsakir eru sem hér segir:
1. Óviðeigandi varðveisla sýna eða geymsla í of langan tíma leiðir til erfðafræðilegs DNA niðurbrots.
Tilmæli: Munnþurrkur eru helst teknar ný sýni og ekki ætti að nota varðveittar þurrkur til útdráttar úr erfðaefni DNA.
2. Ef magn vefjasýnis er of lítið mun útdregna erfðaefnis DNA innihaldið vera minna.
Ráðlegging: Fylgdu leiðbeiningum um sýnatöku úr munnþurrku í notkunarhandbókinni, þurrkaðu eins oft og mögulegt er svo hægt sé að festa nægilega margar frumur við munnþurrkuna til að draga úr erfðaefni DNA.
3. Foregene próteasi er óviðeigandi varðveitt, sem leiðir til lækkunar á virkni þess eða óvirkjunar.
Ráðlegging: Staðfestu geymsluskilyrði Foregene próteasans eða skiptu honum út fyrir nýjan Foregene próteasa fyrir ensímhvarf.
4. Losunarvandamál.
Ráðlegging: Notaðu Buffer EB fyrir skolun;ef þú notar ddH2O eða önnur skolefni, staðfestu að pH-gildi skolvatnsins sé á milli 7,0-8,5.
5. Losunarefninu er ekki rétt bætt við í dropatali.
Ráðlegging: Bætið skolunardropum við miðja sílikonhimnuna og látið standa við stofuhita í 5 mínútur til að auka skilvirkni skolunar.
6. Skoðun vökvinn safnast of lítið.
Ráðlegging: Notaðu eluent fyrir erfðafræðilega DNA skolun eins og krafist er í leiðbeiningunum, að minnsta kosti ekki minna en 15 μl.
Lítill hreinleiki erfðafræðilegs DNA einangraðs
Lítill erfðafræðilegur DNA hreinleiki getur leitt til misheppnaðra eða ófullnægjandi niðurstaðna af tilraunum á eftir, svo sem: ekki er hægt að skera ensím upp, PCR getur ekki fengið genabrotið sem vekur áhuga osfrv.
Mögulegar orsakir eru sem hér segir:
1. Heterópróteinmengun, RNA-mengun.
Greining: Hreinsunarsúlan var ekki þvegin með Buffer PW;Buffer PW þvottahreinsunarsúlan var ekki þvegin með réttum miðflóttahraða.
Ráðlegging: Gakktu úr skugga um að engin útfelling sé í flotinu áður en etanóli er bætt við;vertu viss um að þvo hreinsunarsúluna samkvæmt leiðbeiningunum og ekki er hægt að sleppa þessu skrefi.
2. Óhreinindi jónamengun.
Greining: Buffer WB þvottahreinsunarsúlu var sleppt eða þvegin aðeins einu sinni, sem leiddi til leifar af jónamengun.
Ráðlegging: Vertu viss um að þvo Buffer WB 2 sinnum eins og mælt er fyrir um til að fjarlægja leifar af jónum eins mikið og mögulegt er.
3. RNA ensímmengun.
Greining: Erlendum RNösum var bætt við biðminni;Aðgerð PW þvottakerfisins var röng, sem leiddi til RNase leifa, sem hafði áhrif á RNA tilraunaaðgerðir aftan við RNA, eins og in vitro umritun.
Ráðlegging: Foregene röð kjarnsýrueinangrunarsett geta fjarlægt RNA án þess að bæta við viðbótar RNase, þannig að munnþurrkur/FTA kort DNA einangrunarsett þarf ekki að bæta við RNase;vertu viss um að fylgja leiðbeiningunum fyrir Buffer PW þvottahreinsunarsúluna og ekki er hægt að sleppa þessu skrefi.
4. Etanólleifar.
Greining: Buffer WB framkvæmdi ekki skilvindu í tómum túpum eftir þvott á hreinsunarsúlunni.
Ráðlegging: Framkvæmið rétta skilvinduaðgerð fyrir tóma rör samkvæmt leiðbeiningunum.
5. Önnur óhreinindi mengun.
Greining: Vistuð sýni eða sérstök sýni eru ekki formeðhöndluð.
Ráðlegging: Formeðhöndlaðu sýnið vandlega samkvæmt leiðbeiningum.
