Algengar spurningar fyrirAnimal Total RNA einangrunarsett

Eftirfarandi greining á vandamálum sem þú gætir lent í íútdráttur úr dýravef/frumu RNA will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA er ekki dregið út eða afrakstur RNA er lág

Það eru oft ýmsir þættir sem hafa áhrif á skilvirkni bata, svo sem: RNA innihald vefsýnissýnis, vinnsluaðferð, skolrúmmál o.s.frv.

1. Ísbað eða kryógenísk (4 °C) skilvindu var framkvæmd meðan á aðgerðinni stóð.

Ráðlegging: Vinnið við stofuhita (15-25°C) í öllu ferlinu, ekki ísbað og skilið við lágt hitastig.

2. Óviðeigandi varðveisla sýna eða of langur geymslutími sýna.

Ráðlegging: Geymið sýni við -80 °C eða frystið í fljótandi köfnunarefni og forðastu endurtekna frystingar-þíðingu;reyndu að nota ferskan vef eða ræktaðar frumur til RNA útdráttar.

3. Ófullnægjandi sýnisgreining.

Ráðlegging: Þegar vefur er einsleitur skal tryggja að vefurinn sé nægilega einsleitur og að veffrumurnar séu nægilega klofnar til að skýra losun RNA.

4. Losunarefninu er ekki bætt á réttan hátt.

Tilmæli: Staðfestu að RNase-Free ddH₂O er bætt í dropatali við miðja hreinsunarsúluhimnu.

5. Rétt magn af algeru etanóli var ekki bætt við Buffer RL2 eða Buffer RW2.

Ráðlegging: Fylgdu leiðbeiningunum, bættu réttu magni af algeru etanóli við Buffer RL2 og Buffer RW2 og blandaðu vel saman áður en settið er notað.

6. Skammtur vefjasýnis er ekki viðeigandi.

Ráðlegging: Notaðu 10-20 mg af vefjum eða (1-5) × 10⁶frumur á 500 μl biðminni RL1, þar sem óhófleg vefjanotkun getur leitt til minni útdráttar RNA.

7. Óviðeigandi skolunarrúmmál eða ófullkomin skolun.

Ráðlegging: Skolunarrúmmál hreinsunarsúlunnar er 50-200 μl;ef skolunaráhrifin eru ekki fullnægjandi er mælt með því að lengja uppsetningartímann við stofuhita eftir að forhituðu RNase-Free ddH hefur verið bætt við.₂O, td í 5-10 mín.

8.Hreinsunarsúlan hefur etanólleifar eftir Buffer RW2 þvott.

Ráðlegging: Ef það eru etanólleifar eftir þvott með Buffer RW2, skilvindu í tómum túpum í 1 mín., má auka tímann fyrir skiljun í tómu túpunni í 2 mín, eða setja hreinsunarsúluna við stofuhita í 5 mínútur til að fjarlægja etanólleifar nægilega vel.

Hreinsað RNA er brotið niður

Gæði hreinsaðs RNA eru tengd þáttum eins og varðveislu sýnisins, RNase mengun og meðhöndlun osfrv.

1. Vefjasýni eru ekki geymd í tíma.

Ráðlegging: Ef vefjasýni eða frumur eru ekki notuð tímanlega eftir söfnun, skal tafarlaust frysta við -80 °C eða fljótandi köfnunarefni.Til að draga út RNA, notaðu nýtekið vef- eða frumusýni þegar mögulegt er.

2. Endurtekin frostþíðing vefjasýna.

Ráðleggingar: Þegar vefjasýni eru geymd er best að skera þau í litla bita til varðveislu og fjarlægja einn bita þegar þeir eru notaðir til að forðast endurtekna frostþíðingu á sýninu og niðurbrot RNA.

3. RNase er innleitt eða ekki með einnota hanska, grímur o.s.frv. meðan á aðgerðinni stendur.

Ráðlegging: RNA útdráttartilraunir eru best gerðar í aðskildum RNA meðferðarherbergjum og borðið er hreinsað fyrir tilraunina.

Notaðu einnota hanska og grímur meðan á tilrauninni stendur til að lágmarka niðurbrot RNA af völdum innleiðingar RNase.

4. Hvarfefni eru menguð af RNase við notkun.

Ráðlegging: Skiptu út fyrir nýtt Animal Total RNA einangrunarsett fyrir tengdar tilraunir.

5. Skilvindurörin, oddarnir o.s.frv., sem notuð eru við RNA-meðferð, eru menguð af RNase.

Ráðlegging: Staðfestu að skilvindurörin, oddarnir, pípetturnar o.s.frv. sem notaðar eru við RNA-útdrátt séu öll RNase-laus.

Hreinsað fengin RNA hefur áhrif á tilraunir niðurstreymis

RNA hreinsað með hreinsunarsúlunni, ef saltjónirnar, próteininnihaldið er of stórt mun hafa áhrif á tilraunina á eftir, svo sem: öfug umritun, Northern Blot et al.

1. Hið skolaða RNA hefur saltjónaleifar.

Ráðlegging: Staðfestu að réttu magni af etanóli hafi verið bætt við Buffer RW2 og framkvæmið 2 hreinsunarsúluþvotta við miðflóttahraðann sem tilgreindur er fyrir notkun;ef einhverjar saltjónaleifar eru til staðar, látið hreinsunarsúluna standa í Buffer RW2 í 5 mínútur við stofuhita og framkvæma skilvindu til að hámarka fjarlægingu saltmengunar.

2. Etanólleifar í skoluðu RNA.

Ráðlegging: Staðfestu að eftir þvott á biðminni RW2, framkvæmið skiljunaraðgerðina á tómum túpunni við skilvinduhraðann sem tilgreindur er fyrir notkun, aukið tímann fyrir skiljunaraðgerðina í tómu túpunni í 2 mínútur ef enn er etanólleifar, eða látið það vera við stofuhita í 5 mínútur eftir skilvindu í tómu hólknum til að hámarka fjarlægingu á etanólleifum.

Einangrun núllsýrusýnategunda

Foregene's RNA einangrunarsett geta fengið heildar RNA einangrun/útdrátt úr eftirfarandi sýnishornum: Dýravef, planta, frumur, veiru, blóð osfrv.

Hvernig geymi ég settið

Geymsla í stofuhita í 24 mánuði.