RNase er viðkvæmt orð sem margir nemendur sem gera oft RNA-útdráttartilraunir vilja ekki heyra.Fullvopnað var RNA-efnið sem að lokum var dregið út með mjög eitruðu hvarfefnum fenóls og klóróforms niðurbrotið.Ég er ekki sáttur!!!Í dag skulum við kíkja á uppruna hins fræga Rnase.

Ribonuclease (RNase), eða RNase, er kjarnaasi sem getur vatnsrofið RNA í litlar sameindir.RNase, sem prótein af litlum sameindum, er óvenjulega stöðugt .Hefðbundin háhita- og háþrýstingsgufufrjósemisaðgerð og próteinhemlar geta ekki gert það algjörlega óvirkt.Stöðugleiki RNase kemur aðallega frá tvísúlfíðtengjunum í uppbyggingunni.Til dæmis hefur algengur RNase í brisi í nautgripum aðeins 124 amínósýrur, en inniheldur 4 tvísúlfíðtengi.Brennisteinstengi og tvísúlfíðtengi veita RNase framúrskarandi hitastöðugleika.Að auki hefur rnasi tiltölulega litla mólþunga og getur fljótt endurheimt upprunalega lögun sína í mörgum tilfellum.

Auk þess að vera mjög stöðugt,RNases eru alls staðar á rannsóknarstofunni .RNase er líffræðilegur varnarbúnaður.Fyrir frumu er utanaðkomandi RNA oft banvænt.Í samanburði við utanaðkomandi DNA er utanaðkomandi RNA oft hættulegri.RNA er með ánægju umritað og þýtt, þannig að næstum allar lífverur hafa þróað RNasa til að verjast innrás utanaðkomandi RNA.Þess vegna gefa bakteríufrumurnar sem ræktaðar eru á rannsóknarstofunni og þú sem dregur út RNA frá sér ilm af RNase.Líkamsvökvi manna (munnvatn, tár o.s.frv.) inniheldur mikið magn af RNase, svo ekki gráta þegar RNA er brotið niður.Því meira sem þú grætur, því verra er niðurbrot RNA!!Systir Daiyu er ekki hentugur fyrir RNA útdrátt!

Að auki inniheldur viðkvæma húðin þín einnig mikið af RNase og merkin, pípetturnar, kælihurðirnar og hurðarhúðin sem húðin hefur snert innihalda einnig RNase.

Með svo miklu röfli, skulum við kíkja á hvernig á að takast á við RNases.

Það fyrsta sem allir hugsa um þegar RNA er fjarlægt erDEPC(díetýl pýrókarbónat).DEPC denaturerar aðallega próteinið með því að sameinast ímidazólhringnum í RNase virka hópnum histidíni og hindrar þar með virkni ensímsins.0,1% DEPC getur haft betri áhrif til að fjarlægja RNase, en við þurfum að huga að því að DEPC er þekkt krabbameinsvaldandi og því ber að huga sérstaklega að því þegar það er notað.

Fyrir RNase þurfum við að byrja á tveimur þáttum,sú fyrsta er að hindra virkni innræns RNase

Hefðbundin RNA útdráttarhvarfefni eins og gúanidínísóþíósýanat og DTT sem eru í Trizol geta opnað tvísúlfíðtengi RNasa, en það eru enn nokkrir RNasar, sérstaklega í vefjasýnum, svo gaum að lágum hita.

1.Dýfðu vefjasýninu strax í fljótandi köfnunarefni eftir að það hefur verið tekið út, eða í RNA-varðveislulausn sem er í sölu.

2.Eftir að RNA frumusýnisins hefur verið dregið út, bætið því við lysislausnina og leysir það á ísboxið

3. Best er að nota fljótandi köfnunarefni til að mala þegar vefjasýni eru einsleit.Þegar rafmagns einsleitari er notaður án fljótandi köfnunarefnis skaltu gæta þess að forkæla einsleita millistykkið að fullu.

Annað er utanaðkomandi DNasi

1.Vertu fullvopnaður, farðu í rannsóknarfrakka, farðu með grímu og vertu viss um að vera með par af nýjum hönskum (ekki vera svona sparsamur!! Það skal tekið fram að Trizol er ofurætandi, og það er líka mjög sterkt í gegnum hanskana, svo ekki dreypa á hendurnar).

2.Allir notaðir pípettuoddar, EP slöngur, PCR slöngur og annar búnaður verður að vera meðhöndlaður af RNase.Það er hægt að liggja í bleyti í 0,1% DEPC og síðan þrýstingi undir háþrýstingi.Gefðu gaum að aðgerðinni í súð.Staðbundnir harðstjórar geta beint keypt rekstrarvörur til að fjarlægja ensím.

PS: Leyfðu mér að segja þér lata aðferð.Þó að hár hiti og hár þrýstingur geti ekki alveg fjarlægt RNase, mun það fjarlægja stóran hluta þess.2 sinnum af háum hita og háþrýstingi hefur góð áhrif og útdráttur RNA hefur lítil áhrif.

3.Áfengi getur eyðilagt prótein,þannig að hægt er að þurrka RNA útdráttartöfluna með 75% alkóhóli , og hanska má einnig úða með áfengi.

4.Loka RNA-leysislausnina og skilvindurörið ætti einnig að meðhöndla með RNase.DEPC vatn er almennt notuð RNA-leysislausn.Við skulum tala um rétta undirbúningsaðferð DEPC vatns (muna að endurpakka DEPC í atvinnuskyni þegar þú kaupir það)

Bætið DEPC við ofurhreint vatn við 1:1000, hristið vel, látið standa yfir nótt við 37°C og sótthreinsið við 121°C við háan hita og háan þrýsting í 15 mínútur.DEPC vatn er hægt að geyma við -20°C í 1 ml skammta.

Að lokum, til að draga saman: lágt hitastig er lykillinn, rekstrarvörur eru meðhöndlaðar vel, fullvopnaðar og minna tal!

Jæja, það er það fyrir stefnu dagsins.Ég óska ​​þér alls þess RNA styrks og hreinleika sem þú nefndir.Bæði A260/A280 eru 2.0!!!

Auðvitað, ef þú notar astofuhita notkun RNA útdráttarsett, þú gætir ekki lent í ofangreindum vandræðum.

Notkun við stofuhita, án þess að bæta við DNase, dregur heildar-RNA úr frumum á 11 mínútum og dregur heildar-RNA úr dýravef eða plöntum á 30 mínútum.

Fyrir prufusýni, vinsamlegast hafðu samband við:overseas@foregene.com

Skyldar vörur:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/