Mótefni, einnig kölluð immúnóglóbúlín (Ig), eru glýkóprótein sem bindast sérstaklega mótefnavaka.
 
Hefðbundin mótefnablöndur er framleidd með því að bólusetja dýr og safna mótsermi.Þess vegna inniheldur andsermi venjulega mótefni gegn öðrum óskyldum mótefnavökum og öðrum próteinþáttum í sermi.Almennar mótefnavakasameindir innihalda að mestu margar mismunandi epitopur, þannig að hefðbundin mótefni eru líka blanda af mótefnum gegn mörgum mismunandi epitopum.Jafnvel hefðbundin mótefni í sermi sem beint er gegn sömu epitope eru enn samsett úr ólíkum mótefnum sem framleidd eru af mismunandi B frumuklónum.Þess vegna eru hefðbundin mótefni í sermi einnig kölluð fjölstofna mótefni, eða fjölstofna mótefni í stuttu máli.
 
Einstofna mótefni (einstofna mótefni) er mjög einsleitt mótefni framleitt af einni B frumuklóni og beint gegn tiltekinni epitope.Það er venjulega útbúið með blendingatækni - blendingamótefnatækni byggir á frumusamrunatækni, sem sameinar B frumur með getu til að seyta sértækum mótefnum og mergæxlisfrumum með óendanlega vaxtargetu í B-frumu blendingaæxli.Þessi blendingsfruma hefur einkenni móðurfrumu.Það getur fjölgað sér endalaust og ódauðlega in vitro eins og mergæxlisfrumur, og það getur myndað og seyta sértækum mótefnum eins og milta eitilfrumur.Með klónun er hægt að fá einstofna línu sem er unnin úr einni blendingafrumu, það er blendingsfrumulínu.Mótefnin sem það framleiðir eru mjög einsleit mótefni gegn sama mótefnavaka ákvörðunarvaldi, það er einstofna mótefni.
 
Mótefni eru til sem ein eða fleiri Y-laga einliða (þ.e. einstofna mótefni eða fjölstofna mótefni).Hver Y-laga einliða er samsett úr 4 fjölpeptíðkeðjum, þar á meðal tvær eins þungar keðjur og tvær eins léttar keðjur.Létt keðja og þung keðja eru nefnd eftir mólþyngd þeirra.Efst á Y-laga uppbyggingunni er breytilegt svæði, sem er mótefnavakabindistaðurinn.(Útdráttur úr Detai Bio-Monoclonal Antibody Concept)
 
Uppbygging mótefna
Þung keðja
Það eru fimm tegundir af spendýra Ig þungum keðjum, nefndar með grísku stöfunum α, δ, ε, γ og μ.Samsvarandi mótefni eru kölluð IgA, IgD, IgE, IgG og IgM.Mismunandi þungar keðjur eru mismunandi að stærð og samsetningu.α og γ innihalda um það bil 450 amínósýrur, en μ og ε innihalda um það bil 550 amínósýrur.
Hver þung keðja hefur tvö svæði: fasta svæðið og breytilega svæðið.Öll mótefni af sömu gerð eru með sama fasta svæði, en það er munur á mótefnum af mismunandi gerðum.Stöðug svæði þungu keðjanna γ, α og δ eru samsett úr þremur Ig lénum í takt, með löm svæði til að auka sveigjanleika þess;stöðug svæði þungu keðjanna μ og ε eru samsett úr 4 Ig lénum.Breytilegt svæði þungu keðjunnar af mótefninu sem mismunandi B frumur framleiða er mismunandi, en breytilegt svæði mótefnisins sem framleitt er af sömu B frumunni eða frumuklóni er það sama og breytilegt svæði hverrar þungrar keðju er um 110 amínósýrur að lengd., Og mynda eitt Ig lén.
 
Létt keðja
Það eru aðeins tvær tegundir af léttkeðjum í spendýrum: lambda gerð og kappa gerð.Hver létt keðja hefur tvö tengd svið: fast svæði og breytilegt svæði.Lengd léttu keðjunnar er um 211~217 amínósýrur.Léttu keðjurnar tvær sem eru í hverju mótefni eru alltaf eins.Fyrir spendýr hefur léttkeðjan í hverju mótefni aðeins eina tegund: kappa eða lambda.Hjá sumum lægri hryggdýrum, eins og brjóskfiskum (brjóskfiskum) og beinfiskum, finnast einnig aðrar gerðir léttkeðja eins og iota (iota) gerð.
 
Fab og Fc hluti
Hægt er að sameina Fc hlutann beint við ensím eða flúrljómandi litarefni til að merkja mótefni.Það er sá hluti þar sem mótefnið hnoð á plötunni meðan á ELISA ferlinu stendur, og það er einnig sá hluti þar sem annað mótefnið er þekkt og bundið í ónæmisútfellingu, ónæmisblettingu og ónæmisvefjafræði.Mótefni er hægt að vatnsrofsa í tvo F(ab) hluta og einn Fc hluta með próteinlýsandi ensímum eins og papain, eða þau geta verið brotin úr lömsvæðinu með pepsíni og vatnsrofið í einn F(ab)2 hluta og einn Fc hluta.IgG mótefnabrot eru stundum mjög gagnleg.Vegna skorts á Fc hlutanum fellur F(ab) hluti ekki út með mótefnavakanum, né verður hann tekinn af ónæmisfrumum í in vivo rannsóknum.Vegna lítilla sameindabrota og skorts á krosstengjandi virkni (vegna skorts á Fc hluta) er Fab hluti venjulega notaður til geislamerkingar í virknirannsóknum og Fc hluti er aðallega notaður sem blokkunarefni í vefjaefnafræðilegri litun.
 
Breytileg og stöðug svæði
Breyta svæðið (V svæði) er staðsett á 1/5 eða 1/4 (inniheldur um 118 amínósýruleifar) af H keðjunni nálægt N-endanum og 1/2 (inniheldur um 108-111 amínósýruleifar) nálægt N-enda L keðjunnar.Hvert V svæði hefur peptíðhring sem myndast af tvísúlfíðtengjum innankeðju og hver peptíðhringur inniheldur um það bil 67 til 75 amínósýruleifar.Samsetning og fyrirkomulag amínósýra á V svæðinu ákvarðar mótefnavakabindingarsérhæfni mótefnisins.Vegna síbreytilegra tegunda og röð amínósýra á V svæðinu geta myndast margar tegundir mótefna með mismunandi bindandi mótefnavaka sérstöðu.V svæði L keðjunnar og H keðjunnar eru kölluð VL og VH, í sömu röð.Í VL og VH hefur amínósýrusamsetning og röð sumra staðbundinna svæða meiri breytileika.Þessi svæði eru kölluð hypervariable svæði (HVR).Amínósýrusamsetning og fyrirkomulag þeirra hluta sem ekki eru HVR á V svæðinu eru tiltölulega íhaldssöm, sem kallast rammasvæðið.Það eru þrjú ofbreytileg svæði í VL, venjulega staðsett við amínósýruleifar 24 til 34 og 89 til 97 í sömu röð.Þrír HVRs VL og VH heita HVR1, HVR2 og HVR3, í sömu röð.Rannsóknir og greining á röntgenkristalladreifingu sannaði að ofbreytilegt svæði er örugglega staðurinn þar sem mótefnavakinn binst, svo það er kallað complementarity-determining area (CDR).HVR1, HVR2 og HVR3 af VL og VH má kalla CDR1, CDR2 og CDR3 í sömu röð.Almennt hefur CDR3 meiri ofbreytileika.Ofbreytilegt svæði er einnig aðalstaðurinn þar sem sérkennilegir ákvarðanir Ig sameinda eru til.Í flestum tilfellum gegnir H keðjan mikilvægara hlutverki við að bindast mótefnavakanum.
Fasta svæðið (C svæði)er staðsett á 3/4 eða 4/5 (u.þ.b. frá amínósýru 119 að C endastöð) H keðjunnar nálægt C endastöðinni og 1/2 (inniheldur um 105 amínósýruleifar) nálægt C enda L keðjunnar.Hvert starfrænt svæði H-keðjunnar inniheldur um 110 amínósýruleifar og inniheldur peptíðhring sem samanstendur af 50-60 amínósýruleifum tengdum með tvísúlfíðtengjum.Amínósýrusamsetning og fyrirkomulag þessa svæðis eru tiltölulega stöðug í sömu Ig samsætu L keðju dýra og sömu tegund H keðju.Sama, það getur aðeins bundist samsvarandi mótefnavaka sérstaklega, en uppbygging C svæðis þess er sú sama, það er, það hefur sömu mótefnavaka.Hægt er að sameina hesta-and-manna IgG auka mótefni (eða mótefni) með þeim tveimur.Þetta er mikilvægur grunnur til að útbúa efri mótefni og beita flúorljómun, samsætum, ensímum og öðrum merktum mótefnum.
 
 
Skyldar vörur:
Cell Direct RT-qPCR sett