Hvað er mRNA bóluefni
mRNA bóluefnið flytur RNA til frumna líkamans til að tjá og framleiða prótein mótefnavaka eftir viðeigandi breytingar in vitro, sem leiðir til þess að líkaminn framleiðir ónæmissvörun gegn mótefnavakanum og stækkar þar með ónæmisgetu líkamans[1,3].
Mynd 1: Skýringarmynd af áhrifum beinnar inndælingar mRNA bóluefnis [2]
Flokkun mRNA bóluefna
mRNA bóluefni eru skipt í tvær tegundir:afritar ekkimRNA ogsjálfsmögnunmRNA: sjálfmagnandi mRNA kóðar ekki aðeins markmótefnavakann, heldur umritar líka afritunina sem gerir RNA mögnun innanfrumu og próteintjáningarkerfi kleift.MRNA bóluefni sem ekki endurtaka sig kóða aðeins markmótefnavaka og innihalda 5' og 3' óþýtt svæði (UTR).Þau veita alhliða örvun á aðlögunarhæfni og meðfæddu ónæmi, nefnilega in situ mótefnavaka tjáningu og hættumerkjasendingu, og hafa eftirfarandi forrit Eiginleikar[2,3]
●Getur veitt alhliða örvun á aðlögunarhæfni og meðfæddu friðhelgi, nefnilega in situ mótefnavaka tjáningu og hættumerkjasendingu
●Getur framkallað „jafnvægið“ ónæmissvörun, þar með talið húmor og frumuáhrif og ónæmisminni
●Getur sameinað mismunandi mótefnavaka án þess að auka flókið bóluefnissamsetningu
●Stöðug umbót á ónæmismöguleikum er hægt að ná með endurtekinni bólusetningu og engin eða lítil ónæmissvörun er við burðarberanum
●Hitastöðug mRNA bóluefni geta einfaldað flutning og geymslu bóluefna
Mynd 2: Skýringarmynd af mRNA bóluefni og mótefnavaka tjáningarkerfi þess [4]
Eiginleikar mRNA bóluefna
Í samanburði við hefðbundin bóluefni hafa mRNA bóluefni einföld framleiðsluferli, hraðan þróunarhraða, engin þörf á frumurækt og litlum tilkostnaði.Í samanburði við DNA bóluefni þurfa mRNA bóluefni ekki að komast inn í kjarnann og engin hætta er á aðlögun í erfðamengi hýsilsins.Hægt er að stilla helmingunartímann með breytingum.
Tafla 1: Kostir og gallar mRNA bóluefna
|
| Kostur | Galli |
| mRNA bóluefni | Hratt rannsóknir og þróun, framleiðsla bóluefna tekur aðeins 40 daga | Kveikja á óþarfa ónæmissvörun
|
| mRNA óstöðugleiki við lífeðlisfræðilegar aðstæður, auðvelt að brjóta niður | Mun ekki aðlagast erfðamenginu til að forðast mögulegar meðferðarstökkbreytingar
| |
| Engin þörf á neinu kjarnastaðsetningarmerki, umritun | Á eftir að sannreyna skilvirkni öryggiskjarnorku
|
Mynd 3: Flæðirit yfir framleiðslu og undirbúning mRNA bóluefnis [4]
Foregene veiru RNA einangrunarsett
RT-qPCR Auðvelt (Eitt skref)
Bættar aðferðir við undirbúning mRNA bóluefna
Vegna lélegs stöðugleika mRNA sjálfs, auðveldrar niðurbrots af völdum kjarna í vefjum, lítillar frumuinngöngu skilvirkni og lítillar þýðingar skilvirkni, takmarka þessir gallar beitingu mRNA bóluefna.Skilvirkni þýðinga gegnir einnig mjög mikilvægu hlutverki.Hægt er að skipta burðarefnum í veiruferjur og óveiruferjur (þar á meðal lípósóm, ólípósóm, vírusa, nanóagnir osfrv.).Þess vegna er þörf á viðeigandi úrbótaaðgerðum.Eftirfarandi er lyfjafræðileg umbótastefna fyrir mRNA undirbúning[2]
1 Búðu til cap-hliðstæður eða notaðu lokunarensím til að koma á stöðugleika í mRNA og auka próteinþýðingu með því að bindast heilkjörnungaþýðingarbyrjunarstuðli 4E (EIF4E)
2 Stilltu frumefnin á 5′-óþýða svæðinu (UTR) og 3′-UTR til að koma á stöðugleika í mRNA og auka próteinþýðingu
3 Að bæta við Poly(A) hala getur komið á stöðugleika í mRNA og aukið próteinþýðingu
4 Breytt núkleósíð til að draga úr meðfæddri ónæmisvirkjun og auka þýðingu
5 Meðferð með RNase III og hraðri próteinvökvaskiljun (FPLC) hreinsun getur dregið úr ónæmisvirkjun og aukið þýðingu
6 Fínstilltu raðir eða kódon til að auka þýðingu
7 Samafhending þýðingar upphafsþátta og aðrar aðferðir til að breyta þýðingu og ónæmingargetu
Mynd 4: In vitro umritun (IVT) mRNA framleiðslu og samsetningarferli [5]
Stórfelld undirbúningur plasmíðs DNA
Plasmíð DNA hreinsun fjarlægir aðallega aðskotaefni eins og RNA, opið hring DNA endotoxín, hýsilprótein og hýsilkjarnsýru og umbreytir venjulega raðbrigða plasmíði í E. coli.E. coli gengst undir háþéttni gerjun, síðan aðskilnað fasts og vökva og safnað E. coli.E. coli er síðan undirgefinn basískt ljós, miðflótta fast-vökva aðskilnað og örsíun skýringu eftir ljós, ofursíun og styrk eftir skýringu, og síðan litskiljun hreinsun.
Hreinsun á plasmíði DNA:
Foregene General Plasmid Mini Kit
【1】苗鹤凡, 郭勇, 江新香.mRNA疫苗研究进展及挑战[J].免疫学杂志, 2016(05):446-449.
【2】Pardi N, Hogan MJ, Porter FW, o.fl.mRNA bóluefni — nýtt tímabil í bóluefnafræði[J].Nature Reviews Drug Discovery, 2018.
【3】Kramps T., Elbers K. (2017) Inngangur að RNA bóluefnum.Í: Kramps T., Elbers K. (ritstj.) RNA Vaccines.Methods in Molecular Biology, bindi 1499. Humana Press, New York, NY.
【4】Maruggi G, Zhang C, Li J, o.fl.mRNA sem umbreytandi tækni til að þróa bóluefni til að stjórna smitsjúkdómum[J].Sameindameðferð, 2019.
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix, ,Sníða mRNA bóluefni til að koma jafnvægi á meðfædda/aðlögunarhæfa ónæmissvörun, Þróun í sameindalækningum, 26. bindi, 3.2020, bls. 311-323.
Pósttími: Ágúst-05-2021
