Ráð til að bæta límbata

1. Auktu sýnishleðsluna meðan á rafdrætti stendur.

2. Notaðu nýútbúið rafdrættisbuff.

3. Þegar lím er skorið, reyndu að skera aðeins límið með ræmum til að draga úr rúmmáli límskurðar: þú þarft ekki lím með fáum tilgangsbrotum, annars mun það hafa áhrif á batahlutfallið.

4. Eftir að hafa brætt tvö eða fleiri límbúta skaltu nota túpu, sama hversu stórt rúmmálið er og flytja það yfir í sömu dálkinn.

5. Lausnin sem bætt er í sólina getur verið aðeins meira, sem er meira til þess fallið að binda DNA við himnuna, en yfirleitt ekki fara yfir 750ul.

6. Lykillinn að endurheimt hlaups er að binda DNA við súluna í gegnum saltstyrk, sýrustig (hleðslu) og vatnsfælni lausnarinnar í súlunni.Þess vegna, ef pH rafdrættisjafnalausnar er of hátt, má bæta 10 ul (pH 5,0, 3mól/L NaAC) við sólina;til að stöðva DNA sameindir á himnunni betur má bæta 30% ísóprópanóli til að hita upp í vökvann eftir að límið hefur verið leyst upp.

7. Áður en skolefninu er bætt við skal láta súluna vera við stofuhita í nokkrar mínútur (um það bil 10 mínútur) til að gufa upp etanólið að fullu.

8. Að lokum skaltu bæta við minna skolefni til að lágmarka endurheimtarrúmmálið.Almennt er 30-50μl skolefni notað til skolunar (ekki of lítið, annars mun það ekki geta bleyta himnuna, sem er ekki til þess fallið að skola);skolunardroparnir eru í miðju himnunnar, til að skola að fullu út DNA bundið við himnuna.

9. Eftir að skolunarvatninu hefur verið bætt við má skola það í 55 gráðu vatnsbaði í 5 mínútur eða setja í 50 gráðu vatnsbað í meira en 10 mínútur, eða innsigla það með parafilmu við 4 gráður yfir nótt, og skila síðan í skilvindu til bata daginn eftir, áhrifin eru góð.

10.Bætið skilvinduskotinu aftur í aðsogssúluna og skilið aftur.

Ítarlegar aðferðir og aðferðir við endurheimt PCR vöru

1. Venjuleg gúmmíendurvinnsla

Ef þú vilt endurheimta límið er best að nota sett sem er þægilegt og hefur aðeins hærra batahlutfall.Ef þú þarft virkilega að endurheimta það handvirkt geturðu bætt við 3 sinnum rúmmálinu af TE eftir að hafa skorið límið.Eftir bráðnun í vatnsbaði eru fenól, fenól/klóróform dregin út hreint og etanól fellt út.Það er það.

2. DNA endurheimt úr gellum með lágt bræðslumark

Hreinsun á DNA brotum Bætið við TE (10 mmól/l Tris-HCl pH8,0, 0,1 mmól/l EDTA) jafnt og rúmmáli hlaupsins, og setjið í 65°C vatnsbað í 5 mínútur til að leysa hlaupið upp að fullu.

Eftir að það var komið í stofuhita var jöfnu magni af fenóli (mettað með TE, TE var innsiglað í efra lagið og neðra lagið af fenóli fjarlægt) bætt við og blöndunni var blandað varlega saman (þarf ekki að blanda) og skilið í skilvindu við 12.000 snúninga á mínútu í 3 mínútur.Endurtaktu 1-2 sinnum.

Taktu flotið, bættu við 0,1 rúmmáli af 3mól/L natríumasetati (pH 5,2) og 2,5 sinnum rúmmáli af hreinu etanóli til að framkvæma etanólútfellingu.Leysið hreinsað DNA upp með hæfilegu magni af TE, mælið innihaldið og undirbúið fyrir notkun (hægt er að nota það fyrir greiningu á uppbyggingu markgena, undirbúningi rannsaka osfrv.).

3. PCR endurheimt með góðri mögnunarsérhæfni

Ef sérhæfni PCR mögnunar er góð er það bara einföld hreinsun og endurheimt PCR vörunnar.Þú getur bætt 50 ug/ml próteinasa K við PCR vöruna, 37 gráður í 1 klst., dregið út einu sinni með fenóli/klóróformi, útdráttur einu sinni með klóróformi og bætt við 0,1 rúmmáli af flotinu.Natríumasetatið var endurheimt með útfellingu með 2,5 rúmmáli af hreinu etanóli.

Skyldar vörur:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/