Nýlega uppgötvaði ég eitthvað ótrúlegt!Margir háþróaðir sérfræðingar í tilraunastarfi í kringum hann vita ekki einu sinni suma mjög grundvallar tilraunaþekkingarpunkta.

Geturðu til dæmis svarað eftirfarandi spurningum?

Er munur á OD260 og A260?Hvað þýðir hver og einn?
OD er ​​skammstöfunin á optical density (optical density), A er skammstöfunin á absorbance (absorbance), hugtökin tvö eru í raun eins, "optical density" er "absorbance", en "optical density" er í samræmi við flesta landsstaðla og staðlaðari.

Venjulega mælum við OD gildið við 260nm til að reikna út kjarnsýrustyrkinn, svo hvað táknar 1OD?
Kjarnsýra hefur hámarks frásogstopp á bylgjulengd 260nm, sem inniheldur bæði DNA og RNA, sem og sundurleita kjarnsýrubúta (þetta er lykilatriðið).
OD gildið mælt við bylgjulengd 260 nm var skráð sem OD260.Ef sýnið er hreint getur OD260 gildið reiknað út styrk kjarnsýrusýnisins.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (tvíþátta DNA)
=37 μg/ml ssDNA (einþátta DNA)
=40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (frumkirni)
Er einhver tenging og munur á RT-PCR, Realtime-PCR og QPCR?
RT-PCR er stutt fyrir Reverse Transcription PCR
Real Time PCR=qPCR, stutt fyrir Quantitative Real Time PCR
Þrátt fyrir að Real Time PCR (rauntíma fluorescent quantitative PCR) og Reverse Transcription PCR (reverse transcription PCR) virðast báðir vera skammstafaðir sem RT-PCR.En alþjóðasamningurinn er: RT-PCR vísar sérstaklega til öfugumritunar PCR.

Hver eru algengustu nt, bp og kb til að lýsa lengd DNA/RNA í líffræði?
nt = núkleótíð
bp = grunnpar grunnpar
kb = kílógrunnur

Auðvitað myndirðu segja að mörgum sé alveg sama um þessi smáatriði!Allir gera þetta og enginn mun spyrja þig hvað það er.Þú veist að þetta er óþarfi, ekki satt?

Nei, nei, nei, það er mjög nauðsynlegt að vita þetta!vegna hvers?
Vegna þess að þú vilt setja inn grein!Bróðir!Hvort sem þú ert að stefna að útskrift eða sækjast eftir árangri í vísindarannsóknum, verður þú að treysta á greinar til að tala!

Kjarnsýruútdráttur ætti að vera einfaldasta og einfaldasta tilraunin.Gæði kjarnsýruútdráttar ákvarða beint niðurstöður síðari tilrauna.

Þó ég hafi sagt það oft, þá eru samt margir vinir sem eru alveg sama.Í þetta skiptið ákvað ég að fara út úr greininni!

Lágmarksupplýsingar fyrir birtingu á magnbundnum rauntíma PCR tilraunum, nefndar MIQE, er sett af leiðbeiningum um megindlegar flúrljómunartilraunir sem settar eru á markað á alþjóðavettvangi, sem leggja til lágmarksstaðla fyrir þær tilraunaupplýsingar sem nauðsynlegar eru til að meta flúrljómunar megindlegar PCR tilraunir og birta greinar.Með þeim tilraunaaðstæðum og greiningaraðferðum sem tilraunamaðurinn gefur upp geta gagnrýnendur betur metið réttmæti tilraunakerfis rannsakandans.

Það má sjá að í kaflanum um kjarnsýruútdrátt hafa eftirfarandi greiningaratriði verið lögð til,

„E“ gefur til kynna upplýsingar sem þarf að veita og „D“ gefur til kynna upplýsingar sem ætti að veita ef þörf krefur.

Formið er mjög flókið, reyndar vil ég meina að allir þurfi að byrja á

hreinleika (D), ávöxtun (D), heilleika (E) og samkvæmni (E) til að meta kjarnsýrur í þessum fjórum þáttum.

Samkvæmt tilraunavenjum, talaðu fyrst um matsaðferðir hreinleika og einbeitingar.

OD mæling er uppáhalds og auðveldasta greiningaraðferðin fyrir tilraunamenn.Hvað meginregluna varðar mun ég ekki fara nánar út í það hér.Margar rannsóknarstofur nota nú öfgamikro litrófsmæla til að greina kjarnsýrusýni beint magnbundið.Á meðan gleypnigildið er sýnt gefur forritið beint styrkleikagildi (kjarnsýru, prótein og flúrljómandi litarefni) og tengd hlutföll.Hvað varðar greiningu á OD-gildinu, Vistaðu þessa mynd og þú munt vera í lagi.

Alhliða OD gildi lausnalisti

Hins vegar eru nokkrir fyrirvarar sem þarf að taka sérstaklega fram fyrir þig.

(Þegar allt kemur til alls, ég veit að þú verður að vera þeir sem spara og bíða þar til þú þarft á þeim að halda!)

Athugasemd 1 Búnaður

OD gildið verður fyrir áhrifum af mismunandi búnaði.Svo lengi sem OD260 er innan ákveðins sviðs eru gildin OD230 og OD280 þýðingarmikil.Til dæmis er gleypnisvið hins algenga Eppendorf D30 við 260nm 0 ~ 3A og NanoDrop One of Thermo er við 260nm.Gleypisviðið er 0,5 ~ 62,5A.

Athugasemd 2Þynningarhvarfefni

OD gildið getur haft áhrif á þynningu mismunandi hvarfefna.Til dæmis, OD260/280 lestur á hreinsuðu RNA í pH7,5 10mM Trisbiðminni er á bilinu 1,9-2,1 á meðan íhlutlaus vatnslausnhlutfallið verður lægra, kannski aðeins 1,8-2,0, en það þýðir ekki að gæði RNA breytist Mismunur.

Athugasemd 3Afgangsefni

Tilvist efnaleifa mun hafa áhrif á nákvæmni mælinga á kjarnsýrustyrk og því er nauðsynlegt að forðast prótein, fenól, fjölsykru og fjölfenól leifar í kjarnsýrusýnum eins og hægt er.

Hins vegar er útdráttur með lífrænum hvarfefnum gömul aðferð.Í sölusettum er hægt að ná útdráttaráhrifum með aðsogssúlu sem byggir á kísil ásamt skilvindu, forðast eitruð og skaðleg lífræn hvarfefni sem erfitt er að fjarlægja o.s.frv.. Vandamálið, s.s.Kjarnsýruútdráttarsett Foregene, notar ekki DNase/RNase og eitruð lífræn hvarfefni í gegnum aðgerðina, hratt og öruggt, ogáhrif ergóður(sagði óvart að það væri sköllótt, en ég veit að þú vilt vita það).

Dæmi 1: Erfðafræðilegt DNA útdráttur afrakstur og hreinleiki

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) meðhöndlar jarðvegssýni úr ýmsum áttum og magn og hreinleiki erfðafræðilegs DNA sem fæst er sýnt í eftirfarandi töflu:
Dæmi 2: Afrakstur og hreinleiki vefja RNA útdráttar

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) vann úr ýmsum vefjasýnum og magn og hreinleiki RNA sem fæst er sýnt í töflunni hér að neðan (fyrir músavef):
Hins vegar skaltu ekki halda að þú sért búinn með OD gildið.Ertu með einhverja umhugsun um lykilatriðin sem ég teiknaði fyrir þig að framan?

Takið eftir

Brotnar kjarnsýrusameindir verða einnig reiknaðar í gleypni.Miðað við að þú sért með erfðafræðilega DNA leifar í RNA, þá virðist OD gildi þitt vera mjög hátt, en ekki er hægt að ákvarða raunverulegan styrk RNA.Hvort RNA þitt er Það er ekki ljóst hvort það er niðurbrot, svo við þurfum enn yfirgripsmikla matsaðferð til að gefa nákvæmari dóm, það er mat á heilleika kjarnsýra sem nefnt er í MIQE.