Rannsóknarstofuprófun hefst með söfnun sýna og sýnisöfnun er auðveldast að líta framhjá.Mikilvægast við sýnatöku er að velja rétta sýnishorn, nota viðeigandi sýnatökutæki og framkvæma sanngjarnan flutning og vinnslu.

I.Sample tegund

Algengar tegundir sýnishorna eru sem hér segir:

Sýnatökuaðferðin getur vísað til tækniforskrifta fyrir umhverfisvöktun nýju kransæðavírussins á landbúnaðarverslunarmarkaði (basar)“:

1. Þurrkaðu sýni úr hálsþurrku, höndum, fötum og öðrum hlutum lækna: Nauðsynlegt er að nota veiruvarnarlausnina í vírussýnatökuglasinu og síast að fullu í bómullarþurrkurnar.Yfirborð jarðar) er endurtekið borið á og skolað í meira en 3 sinnum.Á sama tíma er nauðsynlegt að framkvæma margpunkta dreifða sýnatöku á yfirborði hlutarins sem tekinn er sýni.

2. Yfirborðsþurrkusýni úr matvælum: Ekki er hægt að safna matarsýnum beint.Fæðuna sem á að safna ætti að aðskilja vandlega og geyma í hreinum sýnatökupoka áður en þurrkusýni eru tekin.Nauðsynlegt er að nota veiruvarnarlausnina í vírussýnatökuglasinu, eftir að sýnatökubómullarþurrkan hefur legið í bleyti, til að strjúka og skola yfirborð matvælasýnisins sem á að taka ítrekað oftar en þrisvar sinnum.Á sama tíma er nauðsynlegt að framkvæma margpunkta dreifða sýnatöku á sýnisyfirborðinu.

3. Skolpsýni: Í samræmi við dreifingu frárennsliskerfisins á markaðnum skal velja 2-3 skólpsýnistökustaði, með áherslu á innra lagnakerfissöfnun, niðurstreymi vatnsrennslisstefnunnar eða tengingu við lagnakerfi sveitarfélaga.Til að safna þurrkusýni skaltu dýfa því í skólpið með bómullarþurrku til að láta það gleypa skólpið og skola það í sýnatökuglasið oftar en 3 sinnum.Til að safna skólpsýnum skaltu nota pólýetýlen plastflöskur til að safna 30-500 ml skólpvatnssýnum;fyrir skólpsöfnun með meira rúmmál en 500 ml, má nota pólýetýlen plastfötur eða á staðnum sérstakan auðgunarbúnað.Jafnframt er nauðsynlegt að framkvæma fjölpunkta dreifða sýnatöku fyrir skólpsýnatökustað.

4. Dýrasýni: Fyrir lifandi dýr er hægt að nota sýnatökuþurrkur til að safna líkamsyfirborðsþurrku, munnkoksþurrkur og endaþarmsþurrkur og einnig er hægt að safna saur- eða seytisýnum og skrá í samræmi við það á skráningarblaðinu.Fyrir dýrasýni sem hafa gengist undir roðhreinsun o.s.frv., notaðu bómullarþurrkur til að safna líkamsyfirborði þeirra og sýni úr líkamsholum.Nauðsynlegt er að nota veiruvarnarlausnina í vírussýnatökuglasinu til að síast að fullu í bómullarþurrku sýna og endurtaka síðan yfirborð matarsýnisins sem á að safna.Shabu oftar en 3 sinnum.Á sama tíma er nauðsynlegt að framkvæma margpunkta dreifða sýnatöku á sýnisyfirborðinu.

5. Önnur tæki: gámar til að flytja og rækta dýr eins og búr eða fiskabúr.Fyrst skaltu fylgjast með eða skilja sérstakar tegundir dýra sem eru geymdar og ræktaðar í ílátinu og safnaðu þurrkusýnum á innri vegg ílátsins eða fljótandi sýnum af innihaldinu.

6. Safnaðu úðasýni á svæðum þar sem fólk safnast saman, illa loftræstum staðbundnum verslunarsvæðum, skrifstofum og hvíldarherbergjum.

II. Sýnatökutæki
1. Blóðsöfnunarrör
Ef þú þarft að gera kjarnsýrupróf og blóðþynningarsýni síðar, er mælt með því að nota lofttæmi sem inniheldur EDTA segavarnarlyf til að safna blóði;fyrir sermissýni er mælt með því að nota lofttæmi í æð án segavarnarlyfja.

2. Sýnataka

Mælt er með því að nota pólýprópýlenþurrkur í stað kalsíumalgínatþurrka eða þurrku með viðarstöngum, því þau geta innihaldið efni sem gera ákveðnar veirur óvirkar og hindra PCR próf.Ekki er hægt að nota þurrkur með bómullarhausum, vegna þess að bómullartrefjar hafa sterka aðsog á próteini og eru ekki auðveldlega skolaðir út í síðari varðveislulausnina.

Í „Tækniforskriftum fyrir 10-í-1 blönduð söfnun og greiningu á nýjum kórónavíruskjarnsýrum“ er skýrt kveðið á um að „sýnisþurrkur ætti að vera úr pólýester, nylon og öðrum efnum sem ekki eru bómull og ekki kalsíumalgínat og handfangið ætti að vera úr efni sem ekki er úr viði.Brotpunkturinn er um 3 cm frá toppi þurrkuhaussins, sem auðvelt er að brjóta.“

CDC í Bandaríkjunum nefndi einnig „Notaðu aðeins tilbúnar trefjarþurrkur með plast- eða vírskafti.Ekki nota kalsíumalgínatþurrkur eða þurrkur með viðarskafti,þar sem þau geta innihaldið efni sem gera sumar veirur óvirkar og hindra PCR próf.

Eins og er mikið notað er einnota dauðhreinsað nælonflokkunarþurrkur ásamt plaststöng.Flokkunarþurrkan hefur betri vatnsupptöku og losunarhraða.Samkvæmt mismunandi sýnatökustöðum hefur þurrkuhausinn einnig mismunandi stærðir og trefjar.Þykktin.”

3. Sýnishorn af flutningsvörnunarlausn

Veiruóvirkjunarvörnunarlausn: hæfilegt magn af guanidínsaltstyrk og margs konar veirulýsuþáttum getur rýrt veiruna beint til að losa kjarnsýru, óvirkjað RNase og DNase og tryggt heilleika kjarnsýra, sem hægt er að nota til síðari qPCR uppgötvunar.Það er ekki hægt að nota til vírusræktunar og einangrunar.

Veiruflutnings- og varðveislulausn: inniheldur sölt, amínósýrur, vítamín, glúkósa og prótein sem þarf til að lifa af veirunni, sem getur viðhaldið virkni veirunnar.Það er hægt að nota til kjarnsýruútdráttar og greiningar á veirunni í framtíðinni, og það er einnig hægt að nota til að rækta og skilja veiruna.

4. Sýna varðveislu rör og sýna poki

Sýnageymsluglasið á að vera dauðhreinsað plastglas með skrúftappa sem gleypir ekki kjarnsýru.Hvert sýnisglas ætti að vera þakið sýnapoka til að koma í veg fyrir leka og mengun sýnisins.

III.Truflandi efni í sýninu

Efni sem truflar í PCR tilraunum

1. innræn truflun

Efni sem eru í líkamssýninu geta truflað greiningu annarra efna.

Blóð:hem (>1mg/ml), hemín (>0,1ng/μl), þríglýseríð, IgG, osfrv.;

Þvag:Þvagefni (20mM);

hægðir:plöntufjölsykrur, kólat;

Vefur:próteasa, kollagen;

Mjólk: próteasi, kalsíumjón;

Fíkniefni: sýklalyf, veirueyðandi lyf, hormón osfrv.

annað.

2. utanaðkomandi truflun

Það kemur úr efnum sem geta truflað greiningu annarra efna in vitro.Sýnaaukefni og efni sem hægt er að hafa samband við við sýnatöku og vinnslu:

Prófunarvörur: sermi aðskilnaðargel, sýnatökuílát og gúmmítappi, holleggur, holleggsskolafökvi, hanskaduft o.s.frv.

Blóðþynningarlyf: heparín (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), osfrv.;

Lífræn leysiefni: ísóprópanól (>0,1 ae/ml), betaín, dímetýlsúlfoxíð, formamíð, glýserín, PEG, osfrv.;

Sótthreinsiefni: alkóhól (etanól>1%), aldehýð, fenól (fenól>0,2%), peroxíð, sterkar sýrur (HCL), sterkar basar (NaOH), osfrv.;

Þvottaefni:SDS (>0,005%);

Jarðvegur: Humus

Litarefni: Indigo

annað.

Við raunverulegar sýnatökuskilyrði utandyra, svo sem við söfnun umhverfissýna, geta sýnin innihaldið margs konar truflandi efni og samsetning truflandi efna á hverjum stað er mismunandi, sem krefst þess að PCR truflunartilraunir séu gerðar í samræmi við staðbundnar aðstæður.

IV.Geymslu- og flutningsskilyrði sýna

Nýsöfnuð klínísk sýni skulu send til rannsóknarstofu innan 2 til 4 klukkustunda eftir söfnun við 2°C til 8°C.Geymið við 4 ℃ innan 24 klst.Prófa skal sýni sem notuð eru til veirueinangrunar og kjarnsýrugreiningar eins fljótt og auðið er.Sýni sem hægt er að prófa innan 24 klukkustunda má geyma við 4°C;Sýni sem ekki er hægt að greina innan 24 klst. skal geyma við -70°C eða lægri (ef ekki- Geymið við 70°C í kæli við -20°C).

Samantekt:Stöðluð söfnun, flutningur og geymsla sýna er nauðsynleg fyrir síðari prófanir.Falskar neikvæðar niðurstöður margra rannsóknarstofuprófa stafa af óviðeigandi söfnun, flutningi og geymslu sýna sem leiða til niðurbrots veirukjarnsýru.Hins vegar hunsa margar rannsóknarstofur enn mikilvægi sýnatöku.Ég vona að þessi grein geti vakið athygli allra á sýnatöku og gert vísindalegri og sanngjarnari sýnatöku!

Tengd vara:

SARS-CoV-2 afbrigði kjarnsýrugreiningarsett (I) (Multiplex PCR flúrljómunarprófunaraðferð) - Til að greina stökkbrigði frá Brasilíu, Suður-Afríku og Bretlandi