Hversu mikið þú veist

Um Núkleínsýruútdráttur

Upphaf og endir hreinsaðrar kjarnsýru

Allt er erfitt í byrjun, hreinsuð kjarnsýra er mest

Upphaf sameindatilrauna, fyrir síðari tilraunir

Árangur eða mistök hefur afgerandi áhrif.

Spor-/ofur-snefils UV litrófsmælir er vinsæll af mörgum vísindamönnum vegna þess að hann getur greint kjarnsýrustyrk og prótein- og saltjónaleifar á einfaldan, fljótlegan og hagkvæman hátt.

Eins og við vitum öll þýðir A260 kjarnsýrugleypni OD gildi, A280 þýðir próteinþéttni gleypni OD gildi, A230 þýðir saltjón styrk gleypni OD gildi, þannig að A260 getur umbreytt kjarnsýrustyrk, A260/280 þýðir prótein leifar, A260/230 þýðir saltjón leifar, en þetta er bara mælikvarði sem rannsakendur uppgötva á, og þetta er bara regla sem rannsakendur uppgötva.hefðbundin“ að trúa því að það geti útskýrt hreinleika DNA og RNA tilað vissu marki.Það er ekki eini staðallinn til að bera kennsl á kjarnsýruafköst og hreinleika, hann er aðeins notaður sem viðmiðun og hann er ekki „gullstaðall“.

Thermo Fisher ND-2000 handbókin leggur áherslu á áreiðanleika prófunarniðurstaðna

Ástæðan er sú að niðurstöður sem fást með því að nota micro/ultramicro UV litrófsmæli endurspegla aðeins afrakstur og hreinleika kjarnsýra frá hlið og það eru margir áhrifaþættir (sjónleið, sýnisrúmmál, sýnisstyrkur, pH gildi, aðrar jónir sem hafa áhrif á gleypnimælingu o.s.frv.), Mælt OD gildi er ekki endilega nákvæmt.Á sama tíma, vegna skorts á sérhæfni gleypnigildisákvörðunarefnisins, hafa einþátta DNA, tvíþátta DNA, RNA, dNTP og sum prótein öll frásogstoppa við 260nm bylgjulengd, og styrkurinn sem ákvarðaður er af A260 einum er ekki endilega raunverulegt DNA eða RNA.Ekki er hægt að dæma um einbeitingu, heilleika hennar og niðurbrot.

Svo hvernig á að dæma gæði hreinsaðrar kjarnsýru okkar?Auk þess að nota ör/útfjólubláa útfjólubláa litrófsmæli til að greina, er einnig þörf á aðferðum eins og agarósa gel rafdrætti til að sýna sjónrænt hreinleika og heilleika kjarnsýrunnar og til að gefa til kynna styrkinn að vissu marki.Þannig er kjarnsýruafraksturinn og hreinleiki sem fæst með niðurstöðum greiningar ýmissa aðferða trúverðug.

Samanburður á tilraunatöflu

Erfðafræðilegt DNA úr H1299 frumum var dregið út með því að nota DNA útdráttarsett fyrirtækis A og veruleg óhreinindi mengun sást sem leiddi til hás OD gildi

(OD mæligildi og samsvarandi rafskaut)

Matsvísitala

Er til „gullstaðall“ fyrir kjarnsýruávöxtun og gæðaprófanir?

Eftir því sem við vitum er engin einföld, fljótleg og ódýr aðferð til.Hvort sem það er litrófsmælir, hlaup rafdráttur eða massagreining, þá endurspegla þær allar styrk og hreinleika kjarnsýra í lausninni frá mismunandi hliðum og þarf að dæma þær með því að vísa hver í annan.

Besta matsvísitalan er alltafeftirfylgnitilraunaumsóknina.Það hefur ekki áhrif á skilvirkni öfugumritunar og PCR mögnunar.Að fá áreiðanlegar mögnunarafurðir og Ct-gildi og fá fullkomna röð með raðgreiningu er árangursrík kjarnsýruútdráttur.

Til að draga saman, þá ætti viðhorfið til kenninga um aðeins hlutfall að vera mótmælt með þeirri skoðun að „nota góðar tilraunaniðurstöður niðurstreymis sem góðar útdráttarfæribreytur“!

Mælt er með Foregene DNA RNA útdráttarsettum til að fá háan DNA/RNA hreinleika:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/