Blý

Langt RNA sem ekki er kóðað, lncRNA er RNA sem ekki er kóðað með lengri lengd en 200 núkleótíð, venjulega á milli 200-100000 nt.lncRNA stjórnar genatjáningu á epigenetic, umritun og eftir umritun, og tekur þátt í X-litningaþöggun, erfðamengisprentun og litningabreytingum, umritunarvirkjun, umritunartruflunum, kjarnaflutningi, frumuhringsstjórnun, frumuaðgreiningu og skammtajöfnunaráhrifum sem koma í veg fyrir mörg mikilvæg önnur mótunaráhrif, og koma í veg fyrir mörg mikilvæg önnur mótunaráhrif, jón sjúkdóma í mönnum, og eru nú einn af heitustu reitum á sviði líflækninga.

01  Tegundir og eiginleikar LncRNA

lncRNA er skipt í margar tegundir eftir mismunandi uppruna myndunar þess, eins og sýnt er á myndinni hér að ofan.Hefur eftirfarandi eiginleika:

1. lncRNA eru venjulega lengri, með kraftmikilli tjáningu og mismunandi splæsingaraðferðum við aðgreining
2. Í samanburði við erfðaefnisgen, hefur lncRNA venjulega lægra tjáningarstig
3. Flest lncRNA hafa augljósa tímabundna og staðbundna tjáningarsérhæfni í ferli aðgreiningar og þroska vefja
4. Það eru einkennandi tjáningar í æxlum og öðrum sjúkdómum
5. Undirfrumu staðsetningar lncRNA eru fjölbreyttar
6. Röðin er lág í varðveislu en fallið hefur ákveðna varðveislu o.s.frv.

02 Algengar spurningar um LncRNA bakuppskrift

Vegna lágs innihalds lncRNA í frumum, langrar lengdar og mikillar uppbyggingar hefur slíkt RNA oft flókna uppbyggingu eins og stofnlykkja eða hárnælur og RT-qPCR er viðkvæmt fyrir vandamálum vegna misheppnaðrar öfugumritunar eða lítillar skilvirkni.

03 LncRNA öfug umritun lausn

Í aðalreglunni er ferlið þar sem RNA vírusar nota sinn eigin bakrit til að búa til DNA með því að nota RNA sem sniðmát kallað öfug umritun.Ferlið við að nota RNA veiru bakrit til að búa til cDNA sniðmát in vitro er kallað öfug umritun.Helstu þættirnir sem eru innifalin í öfugumritunarkerfinu: RNA sniðmát, öfugumrit, primers og aðrir þættir.

1.RNA sniðmát

Áhrif RNA sniðmáts á öfuga umritun endurspeglast í uppbyggingu þess, hreinleika og heilleika.Því hærra sem hreinleiki og heilleiki útdregna RNA er, því meiri skilvirkni öfugumritunar og því nákvæmari eru síðari magnniðurstöður.RNA sem er hreinsað með algengum RNA útdráttarhvarfefnum inniheldur oft leifar af alkóhóli og gúanidínsöltum, sem hafa sterk hamlandi áhrif á flesta bakrita.

2. Reverse transcriptase

Bakrit hefur lykiláhrif í öllu bakritakerfinu.Heppilegt hitastig fyrir bakritið sem notað er á flestum rannsóknarstofum er yfirleitt 42°C.Reyndar krefst opnun RNA uppbyggingu á háu stigi hærra hitastig og kröfurnar fyrir öfugt umrit eru hærri.

3.Grunnur

Reverse umritun primers innihalda gen-sértæka primers, random primers og Oligo dT primers.Flest lncRNA innihalda ekki polyA hala, og það er mikilvægt að passa vel saman handahófskenndu primerana við Oligo dT.

4.Aðrir íhlutir

Í ljósi þeirrar staðreyndar að RNA er sérstaklega auðvelt að brjóta niður, er hægt að lágmarka innleiðingu íhluta í öfugumritunarkerfinu, sem getur í raun komið í veg fyrir innkomu RNase og tryggt hnökralaust framvindu öfugumritunar.

Foregenefær úr RNA sniðmáti, öfug umritun yfir í qPCR

Fylgdu alhliða lncRNA uppgötvuninni þinni

Heildar-RNA dýra IeinangrunKit (með gDNA fjarlægingarsúlu)

Frumu heildar RNA IeinangrunKit (með gDNA fjarlægingarsúlu)

Lnc-RT HeroTM I(Með gDNase)(Super Premix fyrir myndun fyrsta strengs cDNA úr lncRNA)

Rauntíma PCR EasyTM-SYBR Grænn I

Akostir ofRNA útdráttur:

Settið notar þriðju kynslóðar RNA útdráttartækni, engin þörf á að nota DNase.

11 mínútur frá ræktuðum frumum með 96, 24, 12 og 6 holu plötum, afkastamikil útdráttur á gDNA-fríu, háhreinu, hágæða heildarfrumu-RNA.

Kostir lncRNA öfugumritunar:

Öfugt umritunarkerfi sérstaklega þróað fyrir LncRNA til að fjarlægja erfðafræðilega DNA mengun fljótt.

Öfug umritunarkerfið hefur mikinn hitastöðugleika og hefur samt góða öfuga umritunargetu við 50°C.

Sniðmát með háu GC innihaldi og flókinni aukabyggingu er hægt að snúa við með mikilli skilvirkni.

Kostirof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase hefur meiri mögnunarvirkni, hærra mögnunarnæmi og meiri mögnunarsérhæfni

Bjartsýni Real PCR Easy Mix gerir SYBR Green I með hærra greiningarnæmi og flúrljómunarstyrkur þess er 3-5 sinnum meiri en svipaðar vörur, sem geta mætt þörfum mismunandi tegunda flúrljómunar magntilrauna.