1: Skiptu um tilraunabirgðir í tíma

Settu upp (NTC) neikvæða stjórn og endurtaktu það mörgum sinnum.Þegar það hefur komið í ljós að PCR vörumengun er á rannsóknarstofunni skaltu skipta um allar tilraunabirgðir í tíma.Svo sem: endurþynna og undirbúa grunninn, endursótthreinsa pípettuoddinn, EP slönguna, ddH2O o.s.frv., skipta út fyrir nýja pípettu og fá tímabundið lánaðar aðrar rannsóknarstofur til að framkvæma PCR tilraunir.Mengaða rannsóknarstofan skal loftræst og geisluð með útfjólubláum geislum þar til PCR-menguninni er eytt áður en haldið er áfram með tilraunina.

2: Lengdu útsetningartíma UV

Það er athyglisvert að til að fjarlægja DNA mengun ætti að lengja venjulega útfjólubláa geislun um 2 klukkustundir en venjulega.Þrátt fyrir það eru áhrif UV-geislunar á að fjarlægja lítil brot (undir 200bp) af DNA-mengun enn ekki góð.

Útfjólublá bylgjulengd (nm) er almennt 254/300nm, og það er nóg til að geisla í 30 mínútur.Það skal tekið fram að þegar UV er valið til að útrýma mengun afgangs PCR efna, skal hafa í huga lengd PCR afurðarinnar og dreifingu basa í afurðaröðinni.UV geislun er aðeins áhrifarík fyrir löng brot yfir 500 bp og hefur lítil áhrif á stutt brot.

Við útfjólubláa geislun munu pýrimídínbasarnir í PCR vörunni mynda dimera.Þessar dímerar geta stöðvað framlenginguna, en ekki geta öll pýrimídín í DNA keðjunni myndað dímer og UV geislun getur einnig brotið dímerana..Hversu dímer myndast fer eftir UV-bylgjulengdinni, gerð pýrimídíndímersins og röð kirna sem liggja að dímerstaðnum.Þess vegna, ef PCR mögnuðu brotin eru lítil, er mælt með því að nota UNG and-PCR vörumengunarkerfið.

3: Algengt notaðir DNA-mengunarhreinsiefni

Auðvelt myndast úðabrúsa þegar pípettum er bætt við, sem erfitt er að forðast, og það sest fljótt.Þess vegna er það án efa góður kostur að nota oft sérstaka DNA-mengunarhreinsiefni til að koma í veg fyrir útbreiðslu DNA-mengunar.

4: Notaðu UNG mengunarvarnarkerfi

Eftir að PCR vörumengunin hefur verið fjarlægð getur prófunarstofan notað UNG and-PCR vörumengunarkerfið til að koma í veg fyrir PCR vörumengun.Á almennum rannsóknarstofum er hægt að framkvæma einfaldar tilraunaskiptingar, aðgreina PCR vörusvæðið nákvæmlega frá öðrum svæðum, setja ákveðnar rannsóknarstofureglur og -reglur og stunda viðeigandi þjálfun til að koma í veg fyrir að PCR vörumengun komi fram.

Ráðleggingar: Að koma á fót sanngjörnu PCR rannsóknarstofu, viðhalda góðu PCR umhverfi, móta staðlaðar PCR rekstraraðferðir og rækta stranga rekstrarvitund tilraunamanna eru lykillinn að því að koma í veg fyrir eða draga úr mengun PCR tilrauna.