Eftirfarandi greining á hugsanlegum vandamálum íBuccalþurrka/fríverslunarsamningur card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Hreinsunarsúlan er stífluð

Í þessu setti, við erfðafræðilega DNA útdráttaraðgerðina, er hreinsunarsúlan aðsoguð beint á ensímlýsublöndu sýnisins án skilvinduskrefs og hreinsunarsúlan getur verið stífluð vegna ófullkominnar ensímmyndunar og mikillar seigju sýnisins.

Eftirfarandi mögulegar orsakir eru sem hér segir:

1. Ófullkomin ensímmelting vefjasýna.

Ráðlegging: Hægt er að lengja sýnisvinnslutíma Foregene próteasa á viðeigandi hátt eða taka ofanvatnið eftir skilvindu við 12.000 rpm (~13.400× g) í 5 mín.

2. Óhófleg notkun vefjasýna eða stórra vefja.

Ráðlegging: Best er að fara ekki yfir 1Buccal þurrka í sýninu;ef sýnið er of stórt, aukið skammtinn af Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 í samræmi við það.

3. Sýnisseigjan er of há.

Ráðlegging: Hægt er að þynna sýni á viðeigandi hátt með 10 mM af Tris-HCl fyrir erfðafræðilega DNA útdrátt.

4. Brot af blóðkortinu hafa verið soguð.

Ráðlegging: Tímabundinn skilvindutími í þrepi 6 við erfðaefnisútdrátt blóðbletta (FTA-korts) er hægt að lengja á viðeigandi hátt.

Lítil uppskera eða ekkert DNA

Það eru oft ýmsir þættir sem hafa áhrif á afköst erfðaefnis DNA, þar á meðal uppruna sýna, geymsluaðstæður sýna, undirbúningur sýna, meðhöndlun osfrv.

Ekki er hægt að fá erfðafræðilegt DNA við útdrátt

Mögulegar orsakir eru sem hér segir:

1. Óviðeigandi varðveisla sýna eða geymsla í of langan tíma leiðir til erfðafræðilegs DNA niðurbrots.

Ráðlegging: Helst ætti að taka ný sýni úr munnþurrku og ekki er ráðlegt að nota varðveitta þurrku fyrir erfðafræðilega DNA útdráttaraðgerðir;blóðblettasýni ættu að tryggja að gæðin séu hæf og geymslutíminn ætti ekki að vera of langur.

2. Of lítil vefjanotkun getur leitt til þess að ekki er dregið úr samsvarandi erfðaefnis DNA.

Tilmæli: Fylgdubuccal leiðbeiningar um sýnatöku á þurrku í notkunarhandbókinni og þurrkaðu eins oft og mögulegt er svo hægt sé að festa nægilega margar frumur við munnþurrkuna til að draga úr erfðaefni DNA;fyrir útdrátt blóðblettasýnis er hægt að auka skurðsvæðið á blóðblettum á viðeigandi hátt.

3. Foregene próteasi er óviðeigandi varðveitt, sem leiðir til lækkunar á virkni þess eða óvirkjunar.

Ráðlegging: Staðfestu geymsluskilyrði fyrirhinn Foregene próteasa eða skiptu því út fyrir nýjan Foregene próteasa fyrir ensímhvarf.

4. Óviðeigandi varðveisla settsins eða geymslutími er of langur, sem leiðir til bilunar á sumum íhlutum í settinu.

Tilmæli: Kauptu nýjanBuccal þurrka DNAeinangrun sett fyrir tengdar aðgerðir.

5. Buffer WB bætir ekki við algeru etanóli.

Ráðlegging: Staðfestu að biðminni WB bætir við réttu magni af algeru etanóli.

6. Skorefninu er ekki rétt bætt við sílikonfilmuna.

Ráðlegging: Bættu við 65°CForhitað skolefni fellur niður á miðja sílikonhimnuna og látið standa við stofuhita í 5 mínútur til að auka skilvirkni skolunar.

Low-yield erfðafræðilegt DNA einangrað

Eftirfarandi mögulegar orsakir eru sem hér segir:

1. Óviðeigandi varðveisla sýna eða geymsla í of langan tíma leiðir til erfðafræðilegs DNA niðurbrots.

Tilmæli: Munnþurrkur eru helst teknar ný sýni og ekki ætti að nota varðveittar þurrkur til útdráttar úr erfðaefni DNA.

2. Ef magn vefjasýnis er of lítið mun útdregna erfðaefnis DNA innihaldið vera minna.

Ráðlegging: Fylgdu leiðbeiningum um sýnatöku úr munnþurrku í notkunarhandbókinni, þurrkaðu eins oft og mögulegt er svo hægt sé að festa nægilega margar frumur við munnþurrkuna til að draga úr erfðaefni DNA.

3. Foregene próteasi er óviðeigandi varðveitt, sem leiðir til lækkunar á virkni þess eða óvirkjunar.

Ráðlegging: Staðfestu geymsluskilyrði fyrirthe Foregene Protease eða skiptu því út fyrir nýtt Foregene próteasi fyrir ensímhvarf.

4. Losunarvandamál.

Ráðlegging: Notaðu Buffer EB fyrir skolun;ef þú notar ddH₂O eða önnur skolefni, staðfestu að pH-gildi skolvatnsins sé á milli 7,0-8,5.

5. Losunarefninu er ekki rétt bætt við í dropatali.

Ráðlegging: Bætið skolunardropum við miðja sílikonhimnuna og látið standa við stofuhita í 5 mínútur til að auka skilvirkni skolunar.

6. Skoðun vökvinn safnast of lítið.

Ráðlegging: Notaðu skolefni fyrir erfðafræðilega DNA skolun eins og krafist er í leiðbeiningunum, a.m.k.ekki minna en 15μl.

Lúff hreinleiki of erfðafræðilegt DNAeinangrað

Lítill erfðafræðilegur DNA hreinleiki getur leitt til misheppnaðra eða ófullnægjandi niðurstaðna af tilraunum á eftir, svo sem: ekki er hægt að skera ensím upp, PCR getur ekki fengið genabrotið sem vekur áhuga osfrv.

Mögulegar orsakir eru sem hér segir:

1. Heterópróteinmengun, RNA-mengun.

Greining: Hreinsunarsúlan var ekki þvegin með Buffer PW;Buffer PW þvottahreinsunarsúlan var ekki þvegin með réttum miðflóttahraða.

Ráðlegging: Gakktu úr skugga um að engin útfelling sé í flotinu áður en etanóli er bætt við;vertu viss um að þvo hreinsunarsúluna samkvæmt leiðbeiningunum og ekki er hægt að sleppa þessu skrefi.

2. Óhreinindi jónamengun.

Greining: Buffer WB þvottahreinsunarsúlu var sleppt eða þvegin aðeins einu sinni, sem leiddi til leifar af jónamengun.

Ráðlegging: Vertu viss um að þvo Buffer WB 2 sinnum eins og mælt er fyrir um til að fjarlægja leifar af jónum eins mikið og mögulegt er.

3. RNA ensímmengun.

Greining: Erlendum RNösum var bætt við biðminni;Aðgerð PW þvottakerfisins var röng, sem leiddi til RNase leifa, sem hafði áhrif á RNA tilraunaaðgerðir aftan við RNA, eins og in vitro umritun.

Ráðlegging: Foregene röð kjarnsýraisolatjónasett geta fjarlægt RNA án þess að bæta við RNase,þannig munnþurrkur/FTA kort DNA einangrunarsettþörf't bæta við RNase;vertu viss um að fylgja leiðbeiningunum fyrir Buffer PW þvottahreinsunarsúluna og ekki er hægt að sleppa þessu skrefi.

4. Etanólleifar.

Greining: Buffer WB framkvæmdi ekki skilvindu í tómum túpum eftir þvott á hreinsunarsúlunni.

Ráðlegging: Framkvæmið rétta skilvinduaðgerð fyrir tóma rör samkvæmt leiðbeiningunum.

5. Önnur óhreinindi mengun.

Greining: Vistuð sýni eða sérstök sýni eru ekki formeðhöndluð.

Ráðlegging: Formeðhöndlaðu sýnið vandlega samkvæmt leiðbeiningum.