Höfundar: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Eining: Jiaozhou sjúkrahúsið, Dongfang sjúkrahúsið tengt Tongji háskólanum

Sem stendur er aðalsýnistegundin til að greina kjarnsýruuppgötvun í öndunarfærum hálsþurrkur.Það eru margar tegundir af algengum sýnisvörnunarlausnum, sem allar þurfa að vera í kæli eða frysta fyrir flutning og geymslu;Það er erfitt að stjórna öllu ferlinu við lágt hitastig meðan á söfnunar- og flutningsferlinu stendur og það er erfitt að tryggja gæðaeftirlitið fyrir sýnisprófun^[1-2].

RNase (RNase) er endónukleasi sem vatnsrjúfar RNA, aðallega rjúfa fosfódíestertengi á milli núkleótíða.RNase sameindin er mjög stöðug, það eru tvísúlfíðtengi í byggingunni og virkni hennar krefst ekki tilvistar tvígildra katjóna, þannig að RNase er ekki auðvelt að afneðra og auðvelt er að endurgera hana jafnvel eftir háan hita eða notkun á eðlishreinsunarefnum.RNases skiptast í innræna og utanaðkomandi.Innrænu RNasarnir geta losnað á sama tíma þegar frumur eru rifnar.Þess vegna er það mjög mikilvægt skref í útdráttarferli RNA að útrýma hlutverki innrænna RNasa.Utanaðkomandi RNasar eru víða dreifðir.RNasar eru til í lofti, húð manna, hári og munnvatni, sem eru mikilvægar ástæður fyrir auðvelt niðurbroti RNA^[3].

Gagnafyrirspurn

CANS-CL02-A009 „Umsókn leiðbeininga um gæði og hæfniviðurkenningu lækna á sviði sameindagreiningar“ í tæknikröfunum er lagt til að viðeigandi vatnsgæðastaðlar skuli mótaðir í samræmi við umsóknina;Einnota loftþétt ílát:

RNase/Flokkun

(1) RNase A

Ríbónúkleasi A (RNase A), unnin úr brisi í nautgripum, er endíbónúkleasi sem getur sérstaklega ráðist á 3′ enda pýrimídínleifa á RNA, skorið cýtósín eða úrasíl sem myndast af aðliggjandi kirni.Fosfódíestertengi, lokaafurð hvarfsins er 3′ pýrimídín kirni og fákirni með 3′ pýrimídín kirni í lokin.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) er dregið af Aspergillus orjzae, það virkar sérstaklega á 3′-enda fosfat gúaníns og klofningsstaðurinn er á milli 3′ fosfats gúaníns og 5′ hýdroxýls samliggjandi núkleótíða.Lokaafurð hvarfsins er 3'gúanýlsýra og fákirnisbrot með 3'gúanýlsýru í lokin.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) fannst fyrst úr thymus vefjum kálfs og kóðunargen hans hefur verið klónað inn í Escherichia coli.Það getur brotið niður DNA sérstaklega: RNA þræðir í RNA blendingum tvíþættum, sem leiðir til fákjarna og einkirninga með 3'-OH og 5'-monofosfat endum, það getur ekki brotið niður ein- eða tvíþátta DNA eða RNA.

RNase

Virkni og notkun

Ribonuclease getur hvatt niðurbrot ríbonucleic sýru (RNA) og er hægt að búa til tilbúið.Lyfja smyrsl er notað staðbundið til að meðhöndla áverka og liðverki.Samkvæmt skýrslum getur ríbónúkleasi breytt umbrotum hýsilfrumna, hamlað vírusmyndun, hindrað útbreiðslu inflúensuveiru in vitro og hindrað myndun bóluefnis- og herpesveiru í kjúklingafósturvísum.Klínísk notkun ríbónúkleasa daglega 180 mg inndælingu í vöðva, gagnleg til meðferðar á heilabólgufaraldrinum, ríbónúkleasi getur hvatt niðurbrot ríbónúkleínsýru (RNA) og er nú hægt að búa til tilbúna.Lyfja smyrsl er notað staðbundið til að meðhöndla áverka og liðverki.Samkvæmt skýrslum getur ríbónúkleasi breytt umbrotum hýsilfrumna, hamlað vírusmyndun, hindrað útbreiðslu inflúensuveiru in vitro og hindrað myndun bóluefnis- og herpesveiru í kjúklingafósturvísum.Klínísk notkun ríbónúkleasa daglega 180 mg inndælingar í vöðva er gagnleg til meðferðar á heilabólgufaraldrinum.

RNase

Skilgreining á hemli

Skilgreining á RNase inhibitor unit: Magn ensíms sem þarf til að hindra 50% af virkni 5ng RNase A er ein eining.

Hvernig RNase hemlar virka

Guanidín ísóþíósýanat:

Guanidine isothiocyanate er lífrænt efnasamband með sameindaformúluna C2H6N4S.Aðallega notað í líffræðilegum lækningum, efnafræðilegum hvarfefnum osfrv. Guanidin ísóþíósýanat er próteinlýsandi efni og það er oft notað sem aðalþáttur ljóslausnar í sameindagreiningarhvarfefnum.Það getur greint vef, eyðilagt frumubyggingu og aðskilið kjarnsýru frá kjarnpróteinum og hefur sterka eðlisbreytingu í RNase.Það er áhrifaríkasti RNase hemillinn um þessar mundir.

TRIzol er nýtt heildar-RNA útdráttarhvarfefni sem getur beint út heildar-RNA úr frumum eða vefjum.Það inniheldur efni eins og fenól og gúanidínísóþíósýanat, sem geta truflað frumur hratt og hindrað núkleasa sem frumur gefa út.

(Hins vegar er gúanidínísóþíósýanatið hættulegt heilsu rannsóknarstofunnar.)

RNAsin:

Sýrt glýkóprótein unnið úr rottu lifur eða blastoderm úr mönnum.Rnasin er ósamkeppnishemill RNase, sem getur bundist ýmsum RNaseum til að gera þá óvirka.

(Nánari upplýsingar: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hhár hiti:

Hár hiti er einnig algeng leið til að afnema prótein.

Díetýlpýrókarbónat (DEPC):

DEPC er sterkur en ófullkominn RNase hemill, sem getur hamlað RNase virkni með því að sameinast amínósýru imídasól hringnum í RNase virka hópnum til að deature prótein.

Vanadýl ríbónukleósíð flókið:

Flétta mynduð af vanadíumoxíðjónum og núkleósíðum, sem binst RNase í formi umbreytingarefna, sem geta nánast algjörlega hindrað virkni RNase

annað:

SDS, þvagefni, kísilgúr o.fl. hafa einnig ákveðin hamlandi áhrif á RNase.

Umsagnir sérfræðinga

Li Yujie yfirtæknimaður

Forstöðumaður rannsóknarstofu, Jiaozhou sjúkrahússins, Dongfang sjúkrahússins sem tengist Tongji háskólanum

Til að koma í veg fyrir lífrænt niðurbrot utanaðkomandi RNase ætti að nota grímur, hanska og hatta og skipta þeim oft út meðan á RNA útdráttarferlinu stendur.Öll glervörur verða að bakast í þurrkofni við 200°C í meira en 2 klst.Efni sem notuð eru við bakstur, eins og plast, þarf að meðhöndla með DEPC vatni og þvo það síðan með eimuðu vatni.Hvarfefnin eða tækin sem notuð eru til útdráttar, varðveislu og auðkenningar RNA ættu að vera tileinkuð RNA og setja upp sjálfstætt RNA aðgerðasvæði.

tilvísanir:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bakteríur og vírusar í nefkoki rétt áður en bráðar sýkingar í neðri öndunarfærum koma fram hjá frumbyggjum ástralskra barna[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Sýkingavarnadeild kínverska forvarnarlækningafélagsins á sjúkrahúsum.Leiðbeiningar um söfnun og skoðun á klínískum örverusýnum [J].Chinese Journal of Hospital Infection, 2018(20):3192-3200.

[3] „Klínísk próf tíu þúsund hvers vegna sameindalíffræðiprófunarrúmmál“