Kynning:

RNA, fræðiheiti ribonucleic acid, skammstöfun þess kemur frá RiboNucleic Acid, er tegund kjarnsýra sem myndast með því að tengja að minnsta kosti tugi ríbónkjarna í gegnum fosfódíestertengi.

Forsenda þess að kanna RNA er að vinna úr mengunarlausu heildar-RNA, og grunnregluna um RNA-útdrátt má gróflega draga saman sem hér segir:

1. Truflaðu frumurnar fyrst

2. Fjarlægðu síðan stórsameindaóhreinindi (prótein, lípíð, DNA osfrv.)

3. Að lokum er RNA fellt út á meðan sölt og lífræn leysiefni eru fjarlægð og RNA hreinsað frekar

Fortíð og nútíð útdráttaraðferðar

Fyrsta kynslóð RNA útdráttaraðferðar er TRIzol útfellingaraðferðin (hvarfefni sem notuð eru eru guanidín ísóþíósýanat, fenól, klóróform, osfrv.) fundin upp af afa að nafni Piotr Chomczynski og ömmu Nicoletta Sacchi, vegna þess að þessi uppfinning gerir RNA útdrátt Fljótleg og auðveld, síðan hófst uppbygging RNA rannsókna.

Seinna seldi afi þetta einkaleyfi til Invitrogen og Invitrogen kynnti þessa aðferð fyrir heiminum og varð mikið notuð aðferð.

Seinna var Invitrogen keypt af Thermo!

Fulltrúi vara: Invitrogen's TRIzol hvarfefni

Hins vegar, TRIzol útfellingaraðferðin krefst margfaldrar útfellingar og útdráttar RNA og hvarfefnin sem notuð eru eru eitruð og taka langan tíma að virka.

Þess vegna varð til önnur kynslóð súlu-ensímhreinsunaraðferðar, þar sem kísilgelhimnu var notað sem sérstakt kjarnsýruaðsogsefni til að hámarka endurheimt RNA í sýninu á meðan önnur óhreinindi eru fjarlægð.

Önnur kynslóðar aðferðin einfaldar aðgerðina á grundvelli stöðugrar frammistöðu, dregur úr áhættuþættinum og bætir skilvirkni RNA útdráttar.

Fulltrúarvörur: QIAGEN RNeasy og flestar innlendar vörur

Hins vegar krefjast bæði fyrstu og annarrar kynslóðar aðferðir notkunar á DNase til að fjarlægja DNA mengun, sem veldur nokkrum óþægindum fyrir síðari tilraunir á eftir.Leifar af DNase mun draga úr skilvirkni öfugumritunar og draga úr myndun fyrsta strengs cDNA og hafa þar með áhrif á nákvæmni niðurstaðna.

Þess vegna er þriðju kynslóðar útdráttaraðferðin fínstillt á grundvelli annarrar kynslóðar.Tilraunin þarf ekki að bæta við neinum ensímum og auðvelt er að fá RNA með aðeins tveimur súlum.

Dálkur 1: DNA-hreinsunarsúla til að hreinsa DNA

Dálkur 2: Dálkur eingöngu fyrir RNA aðsogar og endurheimtir RNA sérstaklega

Svo einföld aðgerð sparar ekki aðeins tíma heldur auðveldar hún einnig rekstur tilrauna á eftir!

Fulltrúar vörur: QIAGEN RNeasy Plus ogForegeneRNA hreinsunarröð vörur

（RNeasy Plus）

（ForegenePlant Total RNA Einangrunarsett）

Segðu þér hljóðlega!Foregene's RNA Kit sýnir einnig ofur auðvelt í notkun RNase Eraser, sem getur fjarlægt 400μg af RNase á föstu yfirborðinu á 1 mínútu, án þess að bæta eiturefnum í mannslíkamann!

Mynd1: Samanburðarrit rekstrarferla

Vörur Foregene geta lokið RNA útdrætti í aðeins tveimur lögum, ekki gera aðra afbrýðisama yfir framvindu tilraunarinnar!

Mynd2:Etilraunaniðurstöður samanburðartöflu

Fyrsta kynslóðin (1: TRIzol)

Önnur kynslóð (2: RNeasy of QIAGEN)

Þriðja kynslóðin (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Mynd3: qPCR línurit (magnunarferill graf)

Fyrsta kynslóðin (grænt þýðir TRIzol -, rautt þýðir TRIzol +)

Önnur kynslóðin (himinblár þýðir QIAGEN RNeasy-, rauður þýðir QIAGEN RNeasy +)

Þriðja kynslóðin (blár þýðir QIAGEN RNeasy plus, grænn þýðir Foregene)

(Athugið: qPCR línurit „-“ gefur til kynna að DNasa hafi ekki verið bætt við og DNA-mengun hefur ekki verið fjarlægð. Þess vegna er CT hærri og niðurstaðan ekki nákvæm; „+“ gefur til kynna að DNase hafi verið bætt við og DNA-mengunin hefur verið fjarlægð, niðurstaðan er nákvæm)

Sérhver tæknileg uppfærsla þýðir að rekstur tilraunarinnar er að þróast í einfaldari og notendavænni átt.

Foregene miðar að því að hjálpa fleiri vísindamönnum að spara tilraunatíma og kostnað, fá hágæða tilraunaniðurstöður og í sameiningu skapa verðmætari afrek í vísindarannsóknum.