Nokkrar byltingarkenndar uppfinningar í sögu greiningartækni í mínum huga eru ónæmismerkingartækni sem byggir á meginreglunni um mótefnavaka-mótefnabindingu, PCR tækni og raðgreiningartækni.Í dag munum við tala um PCR tækni.Samkvæmt þróun PCR tækni skiptir fólk PCR tækni í þrjár kynslóðir venjulega: venjuleg PCR tækni, rauntíma flúrljómandi magn PCR tækni og stafræn PCR tækni.
Common PCR tækni
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Kary Mullis fann upp pólýmerasa keðjuverkun (polymerase chain reaction , PCR) árið 1983. Sagt er að þegar hann ók kærustu sinni hafi hann skyndilega fengið innblástursblikk og hugsað um meginregluna um PCR (um kosti þess að keyra).Kary Mullis hlaut Nóbelsverðlaunin í efnafræði árið 1993. The New York Times sagði: „Mjög frumlegt og þýðingarmikið, næstum því að skipta líffræði í pre-PCR og post-PCR tímabil.
Meginreglan um PCR: Undir hvata DNA pólýmerasa er móðurstrengurinn DNA notaður sem sniðmát, og sérstakur grunnurinn er notaður sem upphafspunktur framlengingar, og dótturstrengurinn DNA sem er viðbót við móðurstrengs sniðmátið DNA er afritað in vitro með eðlisbreytingu, glæðingu, framlengingu og öðrum skrefum.Það er mögnunartækni fyrir DNA-myndun in vitro, sem getur magnað upp hvaða mark-DNA sem er í vitro hratt og sérstaklega.
Kostir venjulegs PCR
1.Klassísk aðferð, fullkomnir alþjóðlegir og innlendir staðlar
2.Lægri kostnaður við hvarfefni tækjanna
3.Hægt er að endurheimta PCR vörur fyrir aðrar sameindalíffræðilegar tilraunir
Mælt er með Foregene PCR vél: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Tengdar vörur: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Ókostir venjulegs PCR
1.auðvelt að menga
2.fyrirferðarmikill rekstur
3.aðeins eigindleg greining
4.Miðlungs næmi
5.Það er ósértæk mögnun og þegar ósértæka bandið er jafnstórt og marksviðið er ekki hægt að greina það á milli
CApillary electrophoresis byggt PCR
Til að bregðast við göllum venjulegs PCR hafa sumir framleiðendur kynnt tæki sem byggjast á meginreglunni um háræðarafnám.Rafskautsskrefinu eftir PCR mögnun er lokið í háræðinu.Næmnin er hærra og hægt er að greina mun á nokkrum basum og hægt er að reikna mögnunina út af MAERKER.innihald vöru.Ókosturinn er sá að enn þarf að opna PCR vöruna og setja í tækið og enn er mikil hætta á mengun.
CæðErafhleðslu
2. Rauntíma fluorescent quantitative PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR) tækniFluorescent quantitative PCR, einnig kallað Real-Time PCR, er ný kjarnsýra megindleg tækni þróuð af PE (Perkin Elmer) árið 1995. Þróunarsaga flúrljómandi magn PCR er saga um sálarhrærandi baráttu risa eins og ABI, Roche og Bio-Rad.Ef þú hefur áhuga geturðu skoðað það.Þessi tækni er sem stendur þroskaðasta og mest notaða hálf-magnbundna PCR tæknin.
Mælt er með qPCR vél: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Flúrljómandi litunaraðferð (SYBR Green I):SYBR Green I er algengasta DNA-bindandi liturinn fyrir magn PCR, sem binst ósértækt tvíþátta DNA.Í frjálsu ástandi gefur SYBR Green frá sér veikt flúrljómun, en þegar það er bundið við tvíþátta DNA eykst flúrljómun þess 1000-falt.Þess vegna er heildarflúrljómunarmerkið sem gefið er frá sér við hvarf í réttu hlutfalli við magn tvíþátta DNA sem er til staðar og mun aukast með aukningu á mögnuðu vöru.Þar sem litarefnið binst ósértækt tvíþátta DNA, geta falskar jákvæðar niðurstöður myndast.
Tengdar vörur: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Fluorescent sonde aðferð (Taqman tækni): Á meðanPCR mögnun, sérstökum flúrljómandi rannsaka er bætt við á sama tíma og pari af primerum.Nefndin er línuleg fákirni, með flúrljómandi skýrsluhóp og flúrljómandi slökkvihóp merkt í báðum endum.Þegar rannsakandinn er ósnortinn, frásogast flúrljómandi merki frá fréttamannahópnum af slökkvihópnum og uppgötvunin Það er ekkert flúrljómandi merki;meðan á PCR mögnun stendur (í framlengingarstigi) mun 5'-3' Dicer virkni Taq ensímsins melta og brjóta niður rannsakann, þannig að skýrsluflúrljómandi hópurinn og slökkviflúrljómandi hópurinn eru aðskilin, þannig að flúrljómunarvöktunarkerfið er hægt að taka á móti flúrljómunarmerkinu, þ.e. í hvert skipti sem DNA keðja er samstillt flúormólin er fullkomin samstillt flúormólsins, myndun flúrljómunarmerkja og myndun PCR efna.Taqman rannsóknaraðferðin er algengasta greiningaraðferðin í klínískri uppgötvun.
Tengdar vörur: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Kostir qPCR
1.Aðferðin er þroskuð og stuðningsbúnaðurinn og hvarfefnin fullbúin
2.Meðalkostnaður við hvarfefni
3.Auðvelt í notkun
4.Mikið greiningarnæmi og sérhæfni
Ókostir qPCR
Stökkbreytingin á markgeninu leiðir til þess að greiningin gleymist.
Ekki er hægt að ákvarða greiningarniðurstöðu sniðmáts með lágum styrk.
Það er mikil villa þegar staðalferillinn er notaður fyrir magngreiningu.
3. Digital PCR (digital PCR, dPCR) tækni
Stafræn PCR er tækni til algerrar magngreiningar á kjarnsýrusameindum.Í samanburði við qPCR getur stafræn PCR lesið beint fjölda DNA/RNA sameinda, sem er alger magngreining kjarnsýrusameinda í upphafssýninu.Árið 1999 settu Bert Vogelstein og Kenneth W. Kin-zler formlega fram hugmyndina um dPCR.
Árið 2006 var Fluidigm fyrst til að framleiða dPCR tæki sem byggir á flísum í atvinnuskyni.Árið 2009 setti Life Technologies á markað OpenArray og QuantStudio 12K Flex dPCR kerfin.Árið 2013 setti Life Technologies á markað QuantStudio 3DdPCR kerfið, sem notar háþéttni nanóskala örflögutækni til að dreifa sýnum jafnt í 20.000 einstakar frumur.í viðbragðsvel.
Árið 2011 setti Bio-Rad á markað QX100 dPCR tækið sem byggir á dropum, sem notar vatn-í-olíu tækni til að dreifa sýninu jafnt í 20.000 dropa-vatn-í-olíu, og notar dropagreiningartæki til að greina dropana.Árið 2012 setti RainDance á markað RainDrop dPCR tækið, knúið áfram af háþrýstigasi, til að skipta hverju stöðluðu hvarfkerfi í hvarffleyti sem inniheldur 1 milljón til 10 milljón píkólítra-stig ördropa.
Hingað til hefur stafræn PCR myndað tvær helstu fylkingar, flísagerð og dropategund.Sama hvers konar stafræna PCR eru meginreglur þess að takmarka þynningu, endapunkta PCR og Poisson dreifingu.Hið staðlaða PCR hvarfkerfi sem inniheldur kjarnsýrusniðmát skiptist jafnt í tugþúsundir PCR viðbragða, sem dreifast í flögur eða ördropa, þannig að hvert hvarf inniheldur eins mikið og mögulegt er sniðmátsameind, og eins sameindar sniðmát PCR hvarf er framkvæmt.Með því að lesa flúrljómunina. Tilvist eða fjarvera merkisins er talin og algild magngreining er framkvæmd eftir kvörðun á tölfræðilegri Poisson dreifingu.
Eftirfarandi eru einkenni nokkurra stafrænna PCR palla sem ég hef notað:
1. Bio-Rad QX200 dropar stafrænn PCR Bio-RadQX200 er mjög klassískur stafrænn PCR vettvangur, grunngreiningarferlið: 20.000 sýni eru mynduð af dropaframleiðandanum Vatn-í-olíu ördropar eru magnaðar upp á venjulegri PCR vél og að lokum er flúrljómunarmerki hvers ördropa lesið af ördropalesara.Aðgerðin er flóknari og mengunarhætta miðlungs.
Xinyi TD1 ördropa stafræn PCRXinyi TD1 er innlendur stafrænn PCR vettvangur, grunngreiningarferlið: mynda 30.000-50.000 vatns-í-olíu dropa í gegnum dropagjafa, magna upp á algengu PCR tæki og að lokum standast Dropalesarinn les flúrljós hvers dropa.Bæði dropamyndun og lestur á þessum vettvangi fer fram í sérstökum flís með lítilli hættu á mengun.
STILLA Naica ördropaflís stafræn PCRSTILLA Naica er tiltölulega nýr stafrænn PCR vettvangur.Grunngreiningarferlið er: Bættu hvarflausninni við flísinn, settu flísina í ördropamyndun og mögnunarkerfi og myndaðu 30.000 ördropa.Dreift á flísina og PCR mögnun er lokið á flísinni.Síðan er magnaða flísinn fluttur yfir í greiningarkerfi ördropalesar og flúrljómunarmerkið lesið með því að taka myndir.Þar sem allt ferlið fer fram í lokuðum flís er hættan á mengun lítil.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D flís stafræn PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D er annar klassískur stafrænn PCR vettvangur sem byggir á flísum.Grunngreiningarferli þess er: Bætið hvarflausninni í dreifarann og dreifið hvarflausninni jafnt á flísina með 20.000 örholum í gegnum dreifarann., settu flísina á PCR vélina til að magna og að lokum settu flísina inn í lesandann og taktu mynd til að lesa flúrljómandi merkið.Aðgerðin er tiltölulega flókin og allt ferlið fer fram í lokuðum flís og hættan á mengun er lítil.
5. JN MEDSYS Clarity flís stafræn PCR
JN MEDSYS Clarity er tiltölulega nýr stafrænn PCR vettvangur af flísgerð.Grunngreiningarferlið þess er: Bætið hvarflausninni inn í ílátið og dreifið hvarflausninni jafnt á 10.000 PCR glös sem festar eru í PCR rörið í gegnum ílátið.Á microporous flísinni fer hvarflausnin inn í flísina með háræðsaðgerð og PCR túpan með flísinni er sett á PCR vélina til mögnunar og loks er flísinn settur í lesandann til að lesa flúrljómunarmerkið með því að taka mynd.Aðgerðin er flóknari.Hætta á mengun er lítil.
Færibreytur hvers stafræns PCR vettvangs eru teknar saman sem hér segir:
Matsvísar stafræna PCR vettvangsins eru: Fjöldi skiptra eininga, fjöldi flúrljómandi rása, flókið starf og hætta á mengun.En það mikilvægasta er nákvæmni uppgötvunar.Ein leið til að meta stafræna PCR vettvang er að nota marga stafræna PCR vettvang til að sannreyna hver annan, og önnur leið er að nota staðlað efni með nákvæmum gildum.
Kostir dPCR
1.Að ná algerri magngreiningu
2.Meira næmi og sérhæfni
3.Getur greint lítið afritasýni
Ókostir dPCR1. Dýr búnaður og hvarfefni 2. Flókin aðgerð og langur greiningartími 3. Þröngt greiningarsvið
Sem stendur hafa þrjár kynslóðir af PCR tækni sína eigin kosti og galla og hver hefur sín eigin notkunarsvið og það er ekki samband að ein kynslóð komi í stað hinnar.Stöðugar framfarir tækninnar hafa sprautað nýjum lífskrafti inn í PCR tæknina, sem gerir henni kleift að opna hverja notkunarstefnu á eftir annarri, sem gerir kjarnsýrugreiningu þægilegri og nákvæmari.
Heimild: Dr. Yuan tekur þig í próf
Vörur sem mælt er með:
Pósttími: 18. nóvember 2022
