• facebook
  • linkedin
  • Youtube

Framúrskarandi eiginleiki PCR hvarfsins er mikil mögnunargeta þess og afar mikil næmi.Til þess að bæta PCR frammistöðu og skilvirkni greiningar, erum við staðráðin í að bæta PCR mögnunargetu og greiningarnæmi, en höfuðverkurinn er í ferli tilraunarinnar.Falskar jákvæðar niðurstöður koma oft fram og mjög lítið magn af krossmengun sýna eða PCR vörumengun getur valdið fölskum jákvæðum í tilrauninni.

Fimm tegundir af PCR vörumengun

Það eru margar ástæður fyrir PCR mengun, sem gróflega má skipta í eftirfarandi flokka:

1. Krossmengun milli sýna

1.1

Sýnismengun stafar aðallega af mengun ílátsins til að safna sýninu, eða þegar sýnishornið er komið fyrir, lekur það út úr ílátinu vegna lausrar innsiglunar, eða sýnishornið festist utan á ílátið, sem veldur krossmengun;Mengun leiðir til mengunar á milli sýna;sum örverusýni, sérstaklega veirur, geta breiðst út með úðabrúsum eða myndað úðabrúsa, sem leiðir til gagnkvæmrar mengunar.

2. PCR hvarfefnismengun

Aðalástæðan er sú að við undirbúning PCR hvarfefna mengast sýnisbyssan, ílátið, tvöfalt eimað vatn og aðrar lausnir af PCR kjarnsýrusniðmátinu.

1.2

3.Klónunar plasmíð mengun

1.3

Í sameindalíffræðirannsóknarstofum og sumum rannsóknarstofum sem nota klónuð plasmíð sem jákvæð viðmið er vandamálið með klónuðu plasmíðmengun einnig algengt.Vegna þess að innihald klónunarplasmíðs í rúmmálseiningum er nokkuð hátt, og fleiri verkfæri og hvarfefni eru nauðsynleg í hreinsunarferlinu, og plasmíðið í lifandi frumum er mjög líklegt til að vera mengað vegna sterkrar vaxtar og æxlunargetu lifandi frumna.

4.Mengun á mögnuðum vörum

Mengun magnaðra efna er algengasta mengunarvandamálið í PCR viðbrögðum.Vegna þess að afritamagn PCR vöru er mikið (almennt 1013 eintök/ml), sem er miklu hærra en mörk PCR greiningarfjölda afrita, getur mjög lítið magn af PCR vöru mengun valdið fölskum jákvæðum niðurstöðum.

1.4

5.Loftúðamengun

1.5

Loftúðamengun er líklegasta form mengunar á PCR vörum og það er líka auðveldast að gleyma henni.Það myndast við núning milli vökvayfirborðs og lofts.Almennt getur mengun í úðabrúsa myndast þegar lokið er opnað, þegar sýnið er sogað eða jafnvel þegar hvarfrörið er hrist kröftuglega.Samkvæmt útreikningum getur úðaögn innihaldið 48.000 eintök og því er mengun af völdum hennar vandamál sem verðskuldar sérstaka athygli.

Sérstaklega nota prófunarstofur oft sama primeraparið til að prófa ákveðið gen.Með tímanum mun mikið magn af PCR vörumengun eiga sér stað í rannsóknarstofurýminu.Þegar slík mengun á sér stað er erfitt að útrýma henni á stuttum tíma.

Fyrir fyrstu þrjár tegundir mengunar getum við notað árangursríkar leiðir til að forðast, en mengun sem stafar af PCR vörum er erfitt að koma í veg fyrir, sérstaklega við byggingu óstöðluðra PCR rannsóknarstofa.Í PCR ferlinu, þegar pípettuoddurinn sýgur og blæs vökvanum, og PCR slöngulokið er opnað, myndast úðabrúsa.Erfitt er að útrýma DNA sameindunum sem úðinn ber með sér (einn úði getur borið tugi þúsunda DNA) vegna þess að þær svífa í loftinu.Þegar næsta lota af PCR tilraunum hefur verið kynnt munu rangar jákvæðar óhjákvæmilega eiga sér stað.

Eins og sést á myndinni hér að neðan magnaði neikvæða stjórnin einnig upp samsvarandi áhugasvið:

1.6

Fyrsti hluti þessa tölublaðs um PCR mengun og forvarnir er kynntur hér.Næsta tölublað mun færa þér seinni hlutann „Varnir gegn mengun PCR vöru“, svo fylgstu með!


Birtingartími: 25. júlí 2017